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《分子生物學(xué)檢測食品微生物技術(shù)》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、分子生物學(xué)檢測食品微生物技術(shù)我國的食品安全令人擔(dān)憂，已經(jīng)到了岌岌可危的邊緣，作為檢測部門如何快速、有效的檢測食品中的有害物質(zhì)，建立食品微生物快速檢測方法，對食品質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)控尤為重要。下面是小編搜集整理的相關(guān)內(nèi)容的論文，歡迎大家閱讀參考。 :21世紀(jì)，世界上的各類科學(xué)技術(shù)和專業(yè)學(xué)科都有了長足的發(fā)展和進(jìn)步，比如說生物化學(xué)學(xué)科、免疫學(xué)學(xué)科等，其中作為代表性研究項目的分子生物學(xué)得到了越來越多人的關(guān)注，隨著現(xiàn)代化設(shè)施的更新和計算機(jī)技術(shù)的發(fā)展，分子生物學(xué)的相關(guān)研究成果被大量運(yùn)用在人們生活中，促使了社會的長久進(jìn)步?！ ￡P(guān)鍵詞:分子生物學(xué);食品;微生物 一、分
2、子生物學(xué)的概念闡述 分子生物學(xué)作為一種基礎(chǔ)性學(xué)科，將分子作為一種物質(zhì)來研究生命的相關(guān)現(xiàn)象，比如構(gòu)成細(xì)胞的物質(zhì)，能夠發(fā)生何種物理和化學(xué)變化。在進(jìn)行探究的過程中，這種學(xué)科代表了人們由探究生命的出現(xiàn)和進(jìn)化，可以得到生命所表達(dá)的重要意義。 二、分子生物學(xué)在食品微生物檢測中的應(yīng)用意義 分子生物學(xué)的各項研究成果已經(jīng)滲透進(jìn)了人們的實際生活中，而且起到了促進(jìn)社會發(fā)展，和為全世界解決實際問題的作用。比如將酶催化產(chǎn)生的反應(yīng)和原因運(yùn)用到各類化學(xué)工業(yè)活動中，人工進(jìn)行酶的模擬并生成新的催化劑，不僅能針對性地解決問題，還可以在化學(xué)工業(yè)領(lǐng)域領(lǐng)導(dǎo)新的革命。除了在化學(xué)方面有所
3、益處，對食品安全方面也有巨大意義，它能夠更新微生物檢測技術(shù)，提升了食品安全，保障了食品加工過程中產(chǎn)品的質(zhì)量和人的健康。 三、基于分子生物學(xué)方法的食品微生物檢測技術(shù)研究 3.1以電泳為主導(dǎo)技術(shù)的DNA圖譜技術(shù) 由于排列順序不同的DNA的片段會在變性劑濃度不同的情況下發(fā)生改變，利用不一樣的解鏈行為，使排列順序不同的DNA的片段會停留在不同位置的凝膠上這一特性，提出了DGGE技術(shù)來檢測核酸序列，在被變性劑染色成功后，會在凝膠的各個位置上出現(xiàn)條帶狀物體。這種技術(shù)已經(jīng)被越來越多相關(guān)企業(yè)運(yùn)用，進(jìn)行食品微生物的抽離或測定，檢測微生物的數(shù)量等。J.Theun
4、issen和T.J.Britz等人2004年在南非對含益生菌對食物進(jìn)行了DGGE技術(shù)檢測[6];MilicaNikolic等人則在南非自制的山羊奶干酪中進(jìn)行了PCR-DGGE檢測。在DGGE之后出現(xiàn)的NA指紋圖譜技術(shù)，也叫做溫度梯度凝膠電泳，不同于DGGE的凝膠中使用尿素和甲酰胺濃度梯度的方法，溫度梯度凝膠電泳使用了溫度梯度和在引物的5′端增加3050bpGC片段的新技術(shù)。這種新的方式可以有效地統(tǒng)計出某一區(qū)塊內(nèi)，微生物的數(shù)量和品種，還可以檢測出其他未知的腸道細(xì)菌，雖然Zoetendal等人已將這項TGGE技術(shù)運(yùn)用在了人糞樣微生物的探究分析中，但是針
5、對食品的運(yùn)用還很少?！ ∷?、隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNA技術(shù)(RAPD) 通過將隨機(jī)的引物進(jìn)行PCR反應(yīng)，并加重靶細(xì)胞DNA的比例進(jìn)行分析，這一方法被稱為RAPD分析，它能夠讓研究人員了解DNA的片段的大小和數(shù)量，再根據(jù)DNA在不同基因組中的差異做出判斷。這種方式能夠?qū)⑷緿NA基因定位成目標(biāo)對象，可以辨識極小的差別，非常適合運(yùn)用在研究成果少，特點不明顯的或是DNA序列不凸顯的真菌和乳酸菌的研究中。G.Spano等人利用RAPD-PCR技術(shù)發(fā)現(xiàn)了隱藏在紅葡萄酒中的植物乳桿菌，oseley等人提出的生物素標(biāo)記的沙門菌基因探針，以及Kerdahi等人提出的能夠
6、測試出單核細(xì)胞增生的李斯特菌的，來自非放射性DNA探針，還有陳倩等人能夠檢測出ESIEC大腸桿菌的，根據(jù)HPI毒力島基因生成的rp-z探針。另外還有已轉(zhuǎn)變?yōu)樘厥馍唐返幕蛱结樤噭┖?。美國的GERAK公司采用特殊的基因探針對沙門菌、李斯特菌和大腸桿菌的rRNA進(jìn)行檢驗[6]，最后得出了脫氧核糖核酸雜交篩選比色法。主要檢驗方式分為以下幾步: (1)需要一種與細(xì)菌rRNA相反的基因探針和一份完成增菌培養(yǎng)的樣品，細(xì)菌溶解之后與帶有熒光素標(biāo)記的探針互相雜交。此時樣品中存在靶細(xì)菌rRNA，則帶有熒光素和多聚脫氧腺嘌呤核苷酸(polydA)的探針互相雜交將成立
7、?！ ?2)將包被多聚脫氧胸腺嘧啶核苷酸(polydT)的固相載體測桿與雜交溶液反應(yīng)，如果polydA和polydT間的堿基出現(xiàn)配對，那么雜交核酸分子就被固體載體獲得，并將這種分子培養(yǎng)在辣根過氧化酶-抗熒光素接合劑中，使探針上的熒光素與結(jié)合劑溶合。 (3)固體載體首先放置在酶底物-色原溶液，再由辣根過氧化酶與底物反應(yīng)，最后用酸終止，在450nm處計量吸光度的多少，就能確定樣品中是否存在靶細(xì)菌?！ ×⒒蛐酒 ∩鲜兰o(jì)90年代中期出現(xiàn)的基因芯片技術(shù)，也就是DNA微陣列(DNAmicroarray)，使用微加工技術(shù)構(gòu)建出能將人工產(chǎn)生的基因片段，緊密
8、結(jié)合的、排列有序的出現(xiàn)在硅片等載體上。再根據(jù)被熒光檢測系統(tǒng)掃描過的，和標(biāo)記樣品雜交后的芯片，利用計算機(jī)進(jìn)行分析檢測，得出定
