柴胡疏肝散抗肝纖維化的實驗研究

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1、柴胡疏肝散抗肝纖維化的實驗研究作者：付德才楊世忠宋祥?！菊磕康奶接懖窈韪紊Ω卫w維化大鼠模型αSMA、TGFβ1的影響及其抗纖維化的機制。方法采用40%CCl4皮下注射，制備肝纖維化模型并以柴胡疏肝散干預(yù)，測定肝功能、血清透明質(zhì)酸(HA)、層黏連蛋白(LN)及肝組織羥脯氨酸(HYP)，光鏡觀察肝組織病理變化，免疫組織化學(xué)法檢測肝組織αSMA、TGFβ1表達，RTPCR檢測TGFβ1mRNA的表達。結(jié)果柴胡疏肝散組較模型組:肝功能明顯改善，血清HA及LN顯著降低，肝組織HYP含量明顯少，肝組織纖維化程度明顯改善，肝組

2、織αSMA及TGFβ1表達減少。結(jié)論柴胡疏肝散對CCl4誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化有良好的防治作用?！娟P(guān)鍵詞】柴胡疏肝散；肝纖維化；αSMA；TGFβ1　　近年來柴胡疏肝散抗肝纖維化的臨床研究取得了較好的臨床效果〔1〕，但目前國內(nèi)外尚無柴胡疏肝散抗肝纖維化的基礎(chǔ)研究。本實驗采用四氯化碳(CCl4)大鼠肝纖維化模型,觀察柴胡疏肝散的抗肝纖維化作用,并探討其對α平滑肌肌動蛋白(αSMA)、轉(zhuǎn)化生長因子(TGFβ1)影響及柴胡疏肝散抗肝纖維化的理論機制?！　?材料與方法　　11材料　　111動物及藥物雄性22月齡A試劑盒購自北京

3、中杉生物公司，兔抗大鼠TGFβ1多克隆抗體購自武漢博士德生物工程有限公司，即用型SP免疫組化試劑盒購自福州邁新試劑公司，DAB購自北京中山生物公司，RTPCR兩步法試劑盒購自TAKARA公司，Trizol購自Sangon公司?！　?2方法　　121模型制作參照　　2結(jié)果　　21各組大鼠肝功能改變模型組ALT、AST顯著升高,ALB顯著降低；干預(yù)組ALT、AST較模型組明顯降低,ALB則顯著升高。見表1?！　”?大鼠血清肝功能的變化（略）　　與模型組比較：1)P＜005，與正常組比較：2)P＜001　　22各組大鼠血

4、清纖維化檢查結(jié)果與正常組相比,模型組大鼠肝纖維化各項指標明顯升高(P＜001)，柴胡疏肝散干預(yù)組與模型組比較，HA、LN及PCⅢ明顯降低(P＜001)，但未達到正常對照組的水平。肝組織HYP含量模型組與正常組相比明顯升高(P＜001)，柴胡疏肝散干預(yù)組與模型組比較，明顯降低(P＜001)。見表2。　　表2各組大鼠血清HA、LN、PCⅢ含量變化（略）　　與模型組比較：1)P＜001，與正常組比較：2)P＜001　　23組織形態(tài)學(xué)改變肝臟HE染色顯示,正常大鼠可見少量膠原著色,病理模型組肝小葉結(jié)構(gòu)破壞,纖維組織增生明顯,將

5、肝小葉分隔成大小不等的肝細胞團,肝細胞廣泛變性壞死,匯管區(qū)擴大、膠原沉積。柴胡疏肝散干預(yù)組肝細胞有不同程度的變性壞死,匯管區(qū)及小葉間有少量纖維組織增生,纖維間隔細小,與模型組比較差異顯著。秋水仙堿干預(yù)組肝細胞有不同程度的變性壞死,匯管區(qū)及小葉間有少量纖維組織增生，肝細胞內(nèi)可見脂肪沉積。統(tǒng)計分析，柴胡疏肝散干預(yù)組及秋水仙堿干預(yù)組較模型組纖維化程度較輕(P＜005)，Masson染色膠原面積:模型組與柴胡疏肝散干預(yù)組相比分別為與(129±06)%和(62±04)%，柴胡疏肝散干預(yù)組較模型組為低(P＜001)。見表3。　　表3

6、大鼠肝纖維化的分級（略）　　與模型組比較：1)P＜005,與正常組比較：2)P＜001　　24免疫組化結(jié)果正常組肝組織中幾乎不表達TGFβ1，模型組TGFβ1陽性細胞主要位于中央小葉和門靜脈周圍纖維帶及肝纖維間隔中,主要見于Kuffer細胞、類間質(zhì)細胞質(zhì)及其周圍，柴胡疏肝散干預(yù)組陽性染色程度均較模型組明顯減輕(P＜001)。αSMA在胞漿表達，正常對照組只表達于小動脈及小靜脈，在膽管無表達。模型組αSMA主要表達于匯管區(qū)及纖維間隔，且呈長橢圓形或梭形。實驗表明模型組αSMA免疫組織化學(xué)染色面積明顯升高，顯著高于正常

7、組(P＜001)。柴胡疏肝散治療組及秋水仙堿干預(yù)組明顯低于模型組(P＜005)。見表4?！　”?各組大鼠肝組織TGFβ1及αSMA表達的變化（略）　　與模型組比較：1)P＜005,與正常組比較：2)P＜001　　25RTPCR檢測正常肝組織幾乎不表達TGFβ1mRNA，而模型組為強表達，TGFβ1/GAPDH比值為084±017，遠高于正常組(P＜001)；柴胡疏肝散干預(yù)組TGFβ1/GAPDH比值為057±014，TGFβ1mRNA表達低于模型組(P＜005)。αSMAmRNA模型組表達較正常

8、組明顯增強，比值為097±015(P＜001)；柴胡疏肝散干預(yù)組比值為062±023，與模型組比較(P＜001)。　　3討論　　目前的研究認為，肝纖維化的病理改變是細胞外基質(zhì)(ECM)的增生和降解失衡所致，而病理情況下細胞