肝損傷動物模型研究進(jìn)展

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1、肝損傷動物模型研究進(jìn)展【關(guān)鍵詞】肝疾??；毒物，四氯化碳；醋氨酚；疾病模型，動物肝損傷是各種肝臟疾病的病變結(jié)果，對肝損傷的防治目前仍是一個嚴(yán)峻的課題。通過建立實驗性肝損傷動物模型，研究肝病的發(fā)生機制，篩選保肝藥物，探索保肝作用原理，具有重要的現(xiàn)實意義?，F(xiàn)將近年來國內(nèi)外對實驗性肝損傷動物模型分類、作用原理、造模方法及其優(yōu)缺點等研究進(jìn)展作綜述和探討。1化學(xué)性肝損傷動物模型1.1四氯化碳（carbontetrachloride,CCl4）CCl4導(dǎo)致肝損傷的主要機制目前認(rèn)為與其自身和自由基代謝產(chǎn)物有關(guān)。

2、CCl4代謝產(chǎn)生的自由基進(jìn)入機體后，在肝臟經(jīng)細(xì)胞色素P450激活，生成三氯甲基自由基和三氯甲基過氧自由基，攻擊肝臟細(xì)胞膜上的磷脂分子，使得細(xì)胞膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜發(fā)生氯烷化和脂質(zhì)過氧化，損傷細(xì)胞膜、細(xì)胞器；還能與膜脂質(zhì)和蛋白質(zhì)大分子進(jìn)行共價結(jié)合，影響蛋白質(zhì)代謝，并且破壞膜結(jié)構(gòu)和功能的完整性，鈣離子內(nèi)流增加，影響細(xì)胞正常生理功能，最終導(dǎo)致肝細(xì)胞胞質(zhì)中的可溶性酶滲出，細(xì)胞死亡[1]。CCl4所致肝損傷可分為急性和慢性。急性肝損傷：賴力英等應(yīng)用4mL/kgCCl4劑量灌胃可誘發(fā)SD大鼠急性肝功能衰竭，死亡率達(dá)

3、85%[2]。慢性肝損傷：Zhang等采用2mL/kgCCl4腹膜內(nèi)注射SD大鼠，每周2次，持續(xù)9周可伴有肝細(xì)胞壞死和明顯炎癥的肝硬化[3]。CCl4導(dǎo)致肝損傷是經(jīng)典模型之一，能準(zhǔn)確反應(yīng)肝細(xì)胞功能、代謝及形態(tài)學(xué)變化，重復(fù)性好且經(jīng)濟(jì)。但CCl4同時還損傷動物的心、脾、肺、腎、腦等器官，另外，蒸汽和液體可由呼吸道、皮膚吸收，對人體也有一定毒性，操作時應(yīng)注意。1.2α萘基異硫氰酸酯(αNaphthylisothiocyanate,ANIT)ANIT是一種間接肝毒劑，其主要損害是通過膜脂質(zhì)過氧化反應(yīng)

4、，致使肝細(xì)胞變性、壞死、胞內(nèi)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT）大量溢入血流，同時還導(dǎo)致膽管上皮細(xì)胞腫脹壞死，引起毛細(xì)膽管增生及小葉間膽管周圍產(chǎn)生炎癥，從而造成膽管阻塞，形成明顯的膽汁淤積，并伴隨以點狀壞死為主的肝實質(zhì)細(xì)胞損害，產(chǎn)生梗阻性黃疸，出現(xiàn)高膽紅素血癥和膽汁分泌減少。黃正明等采用ANIT100mg/kg灌胃48h后，ALT、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)升高明顯，尤其是總膽紅素升高更明顯，成功誘導(dǎo)g2+減少，抑制線粒體功能，激活磷脂酶，加速氧化自由基的產(chǎn)生，因此Mg2+/Ca2+的比例失調(diào)也是DGaln導(dǎo)致

5、肝細(xì)胞不可逆損害的因素之一；加上使肝臟谷胱甘肽減少，并激活庫普弗釋放TNFα引起細(xì)胞凋亡[5]。李梅等篩選DGaln造模的最佳劑量，比較DGaln造成的大、小鼠急性肝損傷模型的穩(wěn)定性，發(fā)現(xiàn)DGaln500mg/kg誘導(dǎo)的大鼠急性肝損傷模型肝組織形態(tài)變化顯著且死亡率低，更適用于保肝新藥的篩選與評價[6]。DGaln形成的急性肝功能衰竭模型是研究病毒性肝炎的發(fā)病機制及有效治療藥物理想的實驗動物模型，其優(yōu)點是該模型的病變僅限于肝臟，不涉及其它器官，癥狀、生物化學(xué)、組織學(xué)表現(xiàn)接近人，給藥方便，

6、重復(fù)性好，終點明確，具有可逆性，不造成環(huán)境污染及人體傷害，不需特殊的實驗操作保護(hù)措施，對肝衰竭、肝性腦病、人工肝支持系統(tǒng)的評價研究有重要價值，但價格昂貴導(dǎo)致應(yīng)用受限。1.4二甲基亞硝胺(Dimethylnitrosamine,DMN)DMN是常見的致肝癌劑，它通過微粒體代謝，其中間產(chǎn)物與細(xì)胞核酸、蛋白質(zhì)等結(jié)合可造成細(xì)胞內(nèi)大分子損傷，誘發(fā)大鼠肝竇壁肝星狀細(xì)胞的活化，導(dǎo)致過多增多和沉積，引起肝纖維化形成；同時促進(jìn)竇內(nèi)皮細(xì)胞形成肝竇毛細(xì)血管化，加重肝損傷，促進(jìn)肝纖維化的發(fā)展[7]。DMN肝損傷動物模型

7、可分急性肝損傷動物模型和肝纖維化動物模型。急性肝損傷模型：Horn等采用DMN5mg/kg劑量誘導(dǎo)亞急性肝毒性[8]。肝纖維化模型：Li等予DMN(10μL/kg)腹腔注射N所致的肝纖維化大鼠模型病變類似于人類肝纖維化病變，并且肝纖維化形成率高、死亡率低、造模周期短、肝纖維化形成后病變相對穩(wěn)定等特點，主要用于肝硬化形成的形態(tài)學(xué)改變、機理、生化指標(biāo)的異常改變和門脈高壓機制的研究，還用于肝硬化向肝癌轉(zhuǎn)化機制的研究[10]。缺點為DMN毒性大，易揮發(fā)，排泄物在24h內(nèi)含毒物，易污染環(huán)境和影響周圍人群。

8、1.5硫代乙酰胺(thioacetamide，TAA)TAA具有直接肝毒性作用，攝入后可經(jīng)肝細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞色素P450混合功能氧化酶代謝為TAA硫氧化物，干擾細(xì)胞核內(nèi)RNA轉(zhuǎn)移，影響蛋白質(zhì)合成和酶活力，增加肝細(xì)胞核內(nèi)DNA合成及有絲分裂，促進(jìn)肝硬化發(fā)展，同時激活肝細(xì)胞磷脂酶A2，破壞肝細(xì)胞膜，形成腸源性內(nèi)毒素血癥，導(dǎo)致大面積肝細(xì)胞破壞，并可使ALT、AST明顯增高。TAA小劑量誘發(fā)肝細(xì)胞凋亡，大劑量導(dǎo)致脂質(zhì)氧化和小葉中央壞死、損傷程度與TNFγ和內(nèi)毒素水平正相關(guān)，可被羥自由基清除劑緩解[11]。T