石杉?jí)A甲對(duì)老年大鼠腹部手術(shù)術(shù)后認(rèn)知功能的影響

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1、石杉?jí)A甲對(duì)老年大鼠腹部手術(shù)術(shù)后認(rèn)知功能的影響作者：徐愛(ài)麗馮勇王華周巖【摘要】目的探討腹部手術(shù)操作對(duì)老年大鼠學(xué)習(xí)認(rèn)知能力和海馬CA1區(qū)膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)陽(yáng)性神經(jīng)元的影響以及石杉?jí)A甲干預(yù)的結(jié)果。方法20月齡orris水迷宮測(cè)試,將圓池內(nèi)壁和平臺(tái)漆成黑色，將其分為4個(gè)象限，平臺(tái)置于第4象限沒(méi)入水下約2cm，選擇一個(gè)象限的固定位置作為大鼠入水點(diǎn)，通過(guò)自動(dòng)圖像拍攝系統(tǒng)記錄游泳軌跡，入水至找到平臺(tái)為潛伏期,其總行程為游泳距離〔3〕。術(shù)前學(xué)習(xí)5d，每天測(cè)試4次，取其平均值，術(shù)后1、3、7d分別進(jìn)行測(cè)試，并于術(shù)后7d撤掉平臺(tái)，記錄60s內(nèi)大鼠在每個(gè)象限的

2、停滯時(shí)間和在每個(gè)象限游泳的距離。　　1.4免疫組化染色　　1.4.1灌注和切片大鼠行為學(xué)觀察結(jié)束后，氯胺酮(25mg/kg)腹腔麻醉動(dòng)物，暴露心臟，以0.9%生理鹽水經(jīng)升主動(dòng)脈灌注沖洗后，灌注4%多聚甲醛(pH7.4)900ml，持續(xù)2h后取腦，將腦置于20%蔗糖的PBS溶液中浸置24～48h(4℃)，冰凍冠狀連續(xù)切片(厚度30μm)，海馬組織每5張取1張?！　?.4.2免疫組化染色步驟切片置于0.3%Triton中浸30min，PBS液洗3次，每次15min;在稀釋濃度為1∶2000的山羊抗ChAT多克隆抗體中孵育72h(4℃);PBS液漂洗后

3、在生物素標(biāo)記二抗(1∶100)中,室溫下孵育1h;辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鏈霉卵白素(1∶100)中,室溫下孵育1h;二氨基聯(lián)苯氨(DAB)反應(yīng)液中成色,室溫下10～20min;常規(guī)明膠裱片、脫水、DPX封片。為了計(jì)算ChAT細(xì)胞數(shù)目，采用標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)格的技術(shù)方法，在100倍的光鏡下做ChAT細(xì)胞計(jì)數(shù)，以“500×400μm”為單位，結(jié)果取3個(gè)視野的平均值?！　?.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法計(jì)量資料以x±s表示，用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件，組間比較采用單因素方差分析?！　?結(jié)果　　2.1水迷宮測(cè)試結(jié)果術(shù)后1d麻醉組、手術(shù)組的逃避潛伏期和游泳距離延長(zhǎng)，與對(duì)照組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)

4、意義(P<0.05);術(shù)后3d僅手術(shù)組，石杉?jí)A甲組與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且數(shù)值達(dá)高峰;術(shù)后7d手術(shù)組與對(duì)照組比較有差異(P<0.05),但差距已明顯縮小;術(shù)后石杉?jí)A甲組與手術(shù)組比較均有差異(P<0.05)。石杉?jí)A甲組術(shù)前的逃避潛伏期和游泳路程較對(duì)照組有明顯差異(P<0.05)，見(jiàn)表1。與對(duì)照組(26.5%)、麻醉組(26.3%)、石杉?jí)A甲組(26.5%)比較，術(shù)后7d在60s內(nèi)手術(shù)組(24.1%)的平臺(tái)象限停滯時(shí)間百分比減小(P<0.05)，與對(duì)照組(24.5%)、麻醉組(24.2%)、石杉

5、堿甲組(24.7%)比較，術(shù)后7d在60s內(nèi)手術(shù)組(22.8%)的平臺(tái)象限游泳距離占總游泳距離百分比減小(P<0.05)。這些結(jié)果說(shuō)明脾切除術(shù)后大鼠在水迷宮測(cè)試中的空間認(rèn)知能力受到損害，單次使用氯胺酮僅引起極短期的認(rèn)知減退，而石杉?jí)A甲組減弱了脾切除術(shù)后大鼠在水迷宮測(cè)試中學(xué)習(xí)記憶能力的損害。表1各組大鼠的逃避潛伏時(shí)間、游泳路程1)與對(duì)照組比較，2)與手術(shù)組比較：P<0.05　　2.2免疫組織化學(xué)結(jié)果術(shù)后7d水迷宮測(cè)試后，海馬CA1區(qū)ChAT免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)元在對(duì)照組、手術(shù)組和石杉?jí)A甲組的表達(dá)率分別是(68.17±3.02)、(80.15

6、±2.18)和(70.31±2.56)，手術(shù)組海馬CA1區(qū)ChAT陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組、麻醉組(69.04±2.37)和石杉?jí)A甲組都增多(P<0.05),而對(duì)照組、麻醉組和石杉?jí)A甲組的ChAT陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)相當(dāng)，見(jiàn)圖1?！　?討論　　Moller對(duì)1218例60歲以上的老年患者進(jìn)行了POCD的調(diào)查研究〔4〕，發(fā)現(xiàn)25.8%的患者在術(shù)后1g·kg-1·d-1，均能明顯增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的學(xué)習(xí)、記憶功能。因此選擇石杉?jí)A甲灌胃，0.15mg·kg-1·d-1,為確保療效連續(xù)用藥3idtRH，ScholtenKJ，MaughanPH.Timecoursefor

7、recoveryofazeperformanceandcentralcholinergicinnervationafterfluidpercussioninjury〔J〕.Neurotrauma，1999;16:113947.　　2TangXC.HuperzineA(shuangyiping);apromisingdrugforAlzhEimer′disease〔J〕.ActaPharmacologicaSinica，1996;17(6):481.　　3胡鏡清，溫澤淮，賴世隆.Morris水迷宮檢測(cè)的記憶屬性與方法學(xué)初探〔J〕.廣州中醫(yī)藥大學(xué)

8、學(xué)報(bào),2000;17:1179.　　4MollerJT，CluitmansP，RasmussenLS，etal.Longtermpo