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1、當(dāng)歸對(duì)X線輻射損傷小鼠造血功能恢復(fù)的影響論文李宗山,李恒元,李泉,王志強(qiáng),邱世翠【摘要】目的觀察當(dāng)歸對(duì)Χ線輻射損傷小鼠造血功能恢復(fù)的影響。方法用100%當(dāng)歸浸出液定期給小鼠灌胃,5d后,用Χ線照射0.11CGY,1次/d.freelopoieticrehabilitationofradiatedmice.MethodsFilledthestomachesofthemiceicearroarroarroarrol,溫火煎煮2h,去渣濃縮為200ml備用。美國(guó)Multiskan產(chǎn)全自動(dòng)酶標(biāo)儀;CO2培養(yǎng)箱由美國(guó)Forma公司生產(chǎn);美國(guó)產(chǎn)(IE.USA)冷凍離心機(jī);超凈工作臺(tái)由蘇州凈化設(shè)備廠生
2、產(chǎn);日本東芝DGTT為FLUKA公司產(chǎn)品;二甲基亞砜(DMSO)為蘇州化工研究所生產(chǎn);RPMI-1640為美國(guó)GIBCO公司產(chǎn)品。1.2動(dòng)物分組與給藥BALB/C小鼠36只,體重18~22g,雌雄兼有,購于北京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。將動(dòng)物隨機(jī)分3組,每組12只。Ⅰ組為生理鹽水對(duì)照正常組;Ⅱ組為鹽水加照射組;Ⅲ組為當(dāng)歸藥物加照射實(shí)驗(yàn)組。Ⅰ,Ⅱ組每天用生理鹽水灌胃,0.5ml/次,1次/d;Ⅲ組每天用當(dāng)歸液灌胃,0.5ml/次,1次/d;Ⅱ,Ⅲ組于第6天在灌胃后30min行全身暴露Χ射線照射,用等效方野18cm×18cm,焦點(diǎn)-鼠距80cm。每天照射0.11CGY,1次/d,共照射5次。1.
3、3檢測(cè)指標(biāo)及方法1.3.1骨髓細(xì)胞增殖反應(yīng)[1]頸椎脫臼處死小鼠,無菌操作取小鼠雙股骨骨髓細(xì)胞,調(diào)細(xì)胞濃度至5×106/ml,取100μl加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,設(shè)5個(gè)復(fù)孔,置37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h,終止前5h,摻入MTT(5mg/ml)10μl/孔,終止培養(yǎng)時(shí)離心棄上清,每孔加入100μlDMSO溶解MTT還原產(chǎn)物甲臜(Formazan)溶解緩沖液,充分震蕩10min,全自動(dòng)酶標(biāo)儀用560nm波長(zhǎng)測(cè)OD值,以O(shè)D值代表骨髓細(xì)胞活性。1.3.2定量溶血分光光度測(cè)定法(QHS)[2]本法體外B細(xì)胞產(chǎn)生分泌抗體裂解紅細(xì)胞所釋放的血紅蛋白量(以O(shè)D值表示),其結(jié)果可反應(yīng)機(jī)體體液免
4、疫功能。實(shí)驗(yàn)第5天分別將5%的綿羊紅細(xì)胞0.2ml注入各組小鼠腹腔內(nèi),第11天眼球放血,頸椎脫臼致死,常規(guī)取脾臟,然后進(jìn)行脾細(xì)胞計(jì)數(shù),調(diào)細(xì)胞濃度至1×107/ml,取脾細(xì)胞1ml,1∶10新鮮豚鼠血清(補(bǔ)體)1ml,0.2%綿羊紅細(xì)胞(SRBC)1ml,混勻,37℃水浴1h,1500r/m離心10min,取上清液用96孔細(xì)胞培養(yǎng)板于全自動(dòng)酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)處測(cè)A值,作為QHS反應(yīng)值。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用組間均數(shù)差異t檢驗(yàn)的方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。2結(jié)果當(dāng)歸對(duì)小鼠骨髓細(xì)胞增殖、抗體產(chǎn)生的影響見表1。表1當(dāng)歸對(duì)小鼠骨髓細(xì)胞增殖、抗體產(chǎn)生的影響(略)3討論當(dāng)歸是臨床上常用的中藥,現(xiàn)代研究
5、[3]證實(shí),當(dāng)歸有明顯的抗輻射損傷作用。用當(dāng)歸對(duì)輻射損傷的家兔進(jìn)行腹腔注射,引起家兔染色體畸形變率明顯下降,連續(xù)注射9d,家兔染色體畸變率完全恢復(fù)正常,體外用藥實(shí)驗(yàn)結(jié)果與體內(nèi)注射結(jié)果相同。對(duì)Co-γ射線輻射損傷后的小鼠通過腹腔給予當(dāng)歸注射液,連續(xù)給藥80d后發(fā)現(xiàn),受輻射損傷后的卵巢于照射后第15天開始進(jìn)入恢復(fù)期,比未給當(dāng)歸的對(duì)照組顯著提前。當(dāng)歸多糖對(duì)受照小鼠的造血細(xì)胞亦有輻射防護(hù)作用,照射前注射當(dāng)歸多糖能促進(jìn)照射小鼠脾臟內(nèi)源性造血灶形成,提高受照小鼠骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù),當(dāng)歸多糖對(duì)CFV-C和CFV-S的放射敏感性影響較少,但能防止照射后效應(yīng),能顯著促進(jìn)小鼠CFV-C和CFV-S的恢復(fù),這可
6、能是其抗輻射作用原理之一。水浸液灌飼小鼠,能顯著促進(jìn)血紅蛋白及紅細(xì)胞的生成,其抗貧血作用可能與所含的維生素B12、煙酸、葉酸、亞葉酸等有關(guān)。從上述實(shí)驗(yàn)中可以看出,當(dāng)歸可刺激小鼠抗體的產(chǎn)生,使抗體分泌量增加,與照射組相比有非常顯著性差異(P0.001)。當(dāng)歸對(duì)骨髓細(xì)胞增殖有明顯促進(jìn)作用,與照射組相比有非常顯著性差異(P0.001)。骨髓細(xì)胞增殖歸之于集落刺激因子(CSF)的存在[4],CSF是一組在體內(nèi)外均能強(qiáng)烈刺激造血祖細(xì)胞增殖,分泌并形成細(xì)胞集落的低分子細(xì)胞因子。本研究結(jié)果表明,當(dāng)歸有明顯抗輻射的作用,調(diào)節(jié)骨髓造血和促進(jìn)抗體產(chǎn)生的作用??诜?dāng)歸液可作為Χ線檢查病人或接觸Χ線者的保健飲品
7、,有利于減輕Χ線接觸者免疫造血功能下降的弊端,提高療效。本文為當(dāng)歸的臨床應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)?!?/p>