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《hplc法檢測雷公藤懸浮細胞中雷酚內酯的含量研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、HPLC法檢測雷公藤懸浮細胞中雷酚內酯的含量研宄葉龍飛1,2張景紅1,2(1平僑大學生物醫(yī)學學院福建泉州362021)(2華僑大學分子藥物教育部工程研究中心福建泉州362021)【摘要】采用梯度洗脫的方法，建立了雷公藤懸浮細胞體系中雷酚內酯的定量檢測方法，并考察了Me」A對雷公藤懸浮細胞體系中雷酚內酯含量的作用?！娟P鍵詞】雷公藤懸浮細胞雷酚內酯高效液相色譜【中圖分類號】R44【文獻標識碼】A【文章編號】2095-1752(2014)10-0141-02高效液相色譜法(HighPerformanceLiquidChr
2、omatography/HPLC)一種具有高效、低廉，操作簡便等優(yōu)點的一種檢測方法，廣泛運用于天然藥物的提取、分離和測定研究［1-3］。我們課題組成功從雷公藤懸浮細胞中分離得到雷酚內酯,但是以前的研究中，由于雷酚內酯在雷公藤中含量極少，目前的研究尚未建立穩(wěn)定的HPLC檢測方法，加之雷公藤懸浮細胞體系分離比較復雜。缺乏雷酚內酯的定量分析方法。為此，木文從雷公藤懸浮細胞體系中分離得到雷酚內酯，建立了雷酚內酯HPLC檢測方法。得到了滿意的檢測效果?，F報道如下：1實驗材料和方法1.1藥rfij和試劑雷酚內酯對照品(純度&g
3、t;98%,由木實驗室自主制備獲得)1.2儀器與方法1.2.1儀器高效液相色譜儀Agilent1200型，美國Agilent公司色譜柱：HypersilODS2-C18柱(4.6mm×250mm,5μm)1.2.2色譜分離方法表1雷酚內酯HPLC梯度條件圖3雷酚內酯標準品的標準曲線以峰面積平均值(丫)為縱坐標，以濃度(X)為橫坐標進行線性冋歸(見圖3)，得回歸方程y=118.83x+174.18R2=0.9988。表明雷酚新內酯標準品溶液在1.5-96μg/mL的范圍內具冇良好的線性關系。最
4、低檢測限為0.13μg/mL。2.3日內精密度以6.0、24.0、96.0μg/mL雷公藤甲素標準品溶液為測定需要的低、中、高三個濃度溶液，于Id內每隔4小吋重復測定5次，并計算RSD值和RE值，結果見表3所示。表3日內精密度考察標準品濃度(μg/mL)日內精密度(n=5)測得濃度(平均值-x&Plusmn;SD，μg/mL)精密度(RSD%)準確性(RE%)6.05.78±1.460.196.924.024.00±1.440.162.496.093.00&plu
5、smn;1.200.371.9由表3可以得出6.0、24.0、96.0μg/mL三個濃度的雷公藤甲素標準品溶液在Id內的RSD值分別為0.19%、0.16%和0.37%，RE值分別為6.9%、2.4%和1.9%,表明日內精密度良好。2.4日間精密度以6.0、24.0、96.0μg/mL雷公藤甲素標準品溶液為測定需要的低、中、高三個濃度溶液，分別于制備后0、1、3、5、7d測定其峰面積，并計算RSD值RE值，結果見表4所示。表4日間精密度考察標準品濃度(μg/mL)日間精密度(n=5)測得濃度(平均
6、值-x±SD，μg/mL)精密度(RSD%)準確性(RE%)6.05.78±1.460.137.024.024.02±1.440.252.496.093.85±1.420.071.0由表4可以得出6.0、24.0、96.0μg/mL三個濃度的雷公藤甲素標準品溶液在7d內的RSD值分別為0.13%、0.25%和0.07%,RE值分別為7.0%、2.4%和1.0%,表明日間精密度良好。2.5穩(wěn)定性以6.0、24.0、96.0μg/mL雷公藤甲素標
7、準品溶液為測定需要的低、中、高三個濃度溶液，分別于25°C下放置24h和4°C下放置28d后測定其峰面積，并計算RSD值和RE值，結果見表5和表6和所示。表525r穩(wěn)定性考察標準品濃度(μg/mL)日內精密度(n=3)測得濃度(平均值-x±SD，μg/mL)精密度(RSD%)準確性(RE%)6.05.81±1.460.227.324.023.94±1.450.092.896.093.94±1.420.110.3表64°C穩(wěn)定性考察標準品濃度(&mu
8、;g/mL)日內精密度(n=3)測得濃度(平均值-x±SD，μg/mL)精密度(RSD%)準確性(RE%)6.05.79±1.460.156.924.023.94±1.450.142.796.093.92±1.430.070.9由表5和表6可以看出雷公藤甲素標準品溶液在25"C和4°C下分別放置2
