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《醫(yī)學(xué)畢業(yè)論文人抗hbsag單鏈抗體》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、XX大學(xué)畢業(yè)論文人抗HBsAz單鏈抗體2014年6月25日人抗HBsAg單鏈抗體作者:孟艷玲，溫偉紅，薛茜，賈林濤，鮑煒，劉家云，任君琳，薛采芳，李英輝，王成濟(jì)，楊安鋼【關(guān)鍵詞】肝炎表而抗原GeneconstructionandexpressionofhumanantiHBsAgsinglechainFvTatfusionproteininE.coli[Abstract]AIM:ToconstructafusiongeneofhumanantiHBsAgScFvTatandtoanalyzethebindingactivityandinternalizationofScFvTa
2、tfusionproteinafteritsexpressioninE.coli.METHODS:TwooligonucleotideprimersweredesignedandusedtoamplifytheScFvgene.TheconstructionwasclonedintoexpressionvectorpTATHAcontainingtheproteintransductiondomainTat.TheexpressedproteinwasdetectedbySDSPAGEandWesternblotandpurifiedbyaffinitychromatograp
3、hy.ThebindingspecificityoftheScFvTatfusionproteinwasconfirmedbyindirectELISAandspecificinternalizationoftheScFvTatfusionproteinwasconfirmedbyimmunocytochemistrystainingafterthepurifiedproteinwasincubatedwithHBsAgpositiveornegativehepatocellularcarcinomacells?RESULTS:Restrictionendonucleasedi
4、gestionandDNAsequencingprovedthatScFvgenewascorrectlyclonedintoexpressionvector.SDSPAGEandWesternblotanalysisshowedthatScFvTatfusionproteinwassuccessfullyexpressedinE.coliBL21.IndirectELISAandcompetitioninhibitionELISAconfirmedthattheexpressionproductshadantigenspecificbindingactivity.ScFvTa
5、tfusionproteinwasspecificallyinternalizedintoHBsAgpositivehepatocellularcarcinomacells.CONCLUSION:TheantiHBsAgScFvTatfusionproteinexpressedinE?colicanspecificallyinternalizeintoHBsAgpositivehepatocellularcarcinomacells.【Keywords】singlechainantibody;hepatitisBsurfaceantigens;internalization;g
6、enes,Tat【摘要】目的：構(gòu)建人抗HBsAg單鏈抗體Tat蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域(ScFvTat)融合基因，在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)，并分析ScFvTat融合蛋白的活性及內(nèi)化情況.方法：設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增人抗HBsAg單鏈抗體基因，克隆入含有蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域Tat序列的原核表達(dá)載體pTATHA,在大腸桿菌BL21(DE3)LysS內(nèi)誘導(dǎo)融合蛋白表達(dá).表達(dá)產(chǎn)物用SDSPAGE及Westernblot鑒定，用親和層析柱純化.間接ELISA和ELISA競(jìng)爭(zhēng)抑制實(shí)驗(yàn)分析ScFvTat融合蛋白的親和活性，將純化蛋白與HBsAg陽(yáng)性或陰性肝癌細(xì)胞共孵育后，免疫細(xì)胞化學(xué)染色分析ScFvTat融合蛋白的結(jié)合及
7、內(nèi)化情況.結(jié)果：成功地構(gòu)建了人抗HBsAg單鏈抗體Tat融合蛋白的原核表達(dá)載體，在IPTG誘導(dǎo)下獲得了表達(dá)，表達(dá)的ScFvTat融合蛋白具有與HBsAg結(jié)合的活性，并且能夠特異性內(nèi)化入HBsAg陽(yáng)性肝癌細(xì)胞.結(jié)論：?jiǎn)捂溈贵w與Tat蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域融合后，實(shí)現(xiàn)了ScFvTat融合蛋白的特異性內(nèi)化，為該單鏈抗體的進(jìn)一步應(yīng)用奠定了基礎(chǔ).【關(guān)鍵詞】單鏈抗體；肝炎表面抗原，乙型；內(nèi)化；基因，Tat0引言單鏈抗體(SeFv)及其與效應(yīng)分子的融合體能否高效地內(nèi)化入細(xì)胞對(duì)于其應(yīng)用非常關(guān)鍵.Tat是新近發(fā)現(xiàn)的一
