雙酚a亞急性染毒對小鼠造血功能實驗方案

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1、雙酚A亞急性染毒對小鼠造血功能實驗方案［摘要］雙酚A(bisphenolA,BPA)是酚類化合物中具代表性的一類環(huán)境雌激素污染物。多應(yīng)用于食品和飲料碳酸聚酯包裝材料、牙齒固封劑、金屬罐頭樹脂內(nèi)膜等，能夠模擬和干擾動物體內(nèi)雌激素的正常代謝和生理活動。但目前，含雙酚A的塑料容器，在世界上絕大多數(shù)國家包括中國在內(nèi)都在正常使用。人們忽視了雙酚A的危害。因此，對雙酚A危害的研究意義重大。［關(guān)鍵詞］雙酚A類環(huán)境雌激素危害［中圖分類號］R965［文獻(xiàn)標(biāo)識碼］A［文章編號11009-5349(2013)08-0104-01

2、一、國內(nèi)外對于雙酚A的研究現(xiàn)狀目前，國內(nèi)外對于雙酚A的毒性研究資料，主要為動物實驗調(diào)查研究。例如，研究表明雪貂對雙酚A非常敏感，有時持續(xù)性發(fā)情就會導(dǎo)致骨髓細(xì)胞再生不良；犬對雙酚A也比較敏感，使用不當(dāng)會導(dǎo)致嚴(yán)重的再生障礙性貧血，甚至患睪丸支持細(xì)胞腫瘤的雄犬也有發(fā)生再生障礙性貧血的記錄。嚙齒類動物注射雙酚A可引起血液學(xué)改變，貓則表現(xiàn)出很強(qiáng)的雌激素毒性耐受性。［1］更有資料顯示雙酚A具有一定的胚胎毒性和致畸性，可明顯增加動物卵巢癌、前列腺癌、白血病等癌癥的發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)雙酚A屬于低毒性化學(xué)物。通常情況下，雙酚A對

3、皮膚、角膜、消化道和呼吸道具有中等強(qiáng)度刺激性，對鼠類具發(fā)育毒性。動物試驗發(fā)現(xiàn)雙酚A具有模擬雌激素代謝的效果，即使是極低的劑量也能使動物產(chǎn)生早熟、前列腺增長、精子數(shù)目下降等作用。二、國內(nèi)外雙酚A使用現(xiàn)狀直至目前，一些國家已經(jīng)對雙酚A采取了限制措施：挪威：最早將雙酚A納入受限物質(zhì)的應(yīng)是原定于2008年1月1日生效，后因許多議題尚未達(dá)成共識而延期的挪威PoHS指令，在其對消費性產(chǎn)品中的禁止使用的10種物質(zhì)中就包括雙酚A(BPA)o美國：2009年3月份提案禁止在“可重復(fù)使用的食品容器”和“其他食品容器”中使用(B

4、PA)o這一禁令在正式通過180天后開始生效。中國：2011年5月30日，衛(wèi)生部等6部門對外發(fā)布公告稱，鑒于嬰幼兒屬于敏感人群，為防范食品安全風(fēng)險，保護(hù)嬰幼兒健康，禁止雙酚A用于嬰幼兒奶瓶。但是最近的研究發(fā)現(xiàn)，有超過90%的美國人體尿樣中檢測到了雙酚A[2],這意味著雙酚A仍在被大量使用。雙酚A對健康有害已經(jīng)是一個不言自明的結(jié)論，但大部分人一直以為：日常生活環(huán)境中人們接觸的雙酚A濃度很低，不足以構(gòu)成對人體的危害。在這樣的認(rèn)識下，雙酚A被人們廣泛應(yīng)用。三、實驗設(shè)計方案（一）實驗動物28日齡健康的清潔級ICR小

5、鼠，體重18-23g,雌性小鼠15只，雄性小鼠15只，共30只。（二）實驗試劑和藥品雙酚A：金龍魚花生油。（三）實驗器材lml注射器；小鼠灌胃針頭，冷凍離心機(jī)，冰箱，SysmexF-820半自動血細(xì)胞分析儀測定。（四）實驗步驟用金龍魚花生油將BPA配置成0.012mg/ml,0.12mg/ml兩種濃度的溶液，小鼠的灌胃體積為0.lml/30g/bw,每日上午7點15分灌胃。將小鼠雌雄分籠喂養(yǎng)，晝夜12小時交替，室溫控制在18°C-22°C,濕度控制在50%-60%,食物與水可以自由攝取。待小鼠適應(yīng)1周后，把

6、雄鼠隨機(jī)分為40、400Ug/kg/dayBPA劑量染毒組和對照組，每組雄鼠5只；同時雌鼠隨機(jī)分為40、400Ug/kg/dayBPA劑量染毒組和對照組，每組雌鼠5只。從第2周開始灌胃染毒，染毒持續(xù)30天，對照組（n=10）灌胃溶媒花生油，灌胃體積與時間同染毒組。染毒結(jié)束后，處死動物頸動脈采血，肝素抗凝，re保存?zhèn)溆?，檢測指標(biāo)采用SysmexF-820半自動血細(xì)胞分析儀測定，嚴(yán)格按儀器說明書操作。（五）檢測指標(biāo)1.小鼠血液紅細(xì)胞系各項指標(biāo)檢測：紅細(xì)胞計數(shù)（RBC）、血紅蛋白（HGB）.紅細(xì)胞壓積（HCT）、

7、紅細(xì)胞的平均體積（MCV）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白量（MCH）、紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度（MCHC）、紅細(xì)胞分布寬度變異系數(shù)（RDW-CV）。2.小鼠血液白細(xì)胞系各項指標(biāo)檢測：白細(xì)胞計數(shù)（WBC）、淋巴細(xì)胞百分比（W-SCR）、中性粒細(xì)胞比率（W-LCR）、淋巴細(xì)胞絕對值（W-SCC）、中性粒細(xì)胞絕對值（W-LCC）o3.小鼠血液血小板系各項指標(biāo)檢測：血小板量（PLT）、血小板分布寬度（PDW）、平均血小板體積（MPV）。（六）統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS10.0統(tǒng)汁軟件進(jìn)行分析，組間比較采用方差分析，P