五氯酚鈉急性染毒對小鼠免疫細胞損傷影響

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1、五氯酚鈉急性染毒對小鼠免疫細胞損傷影響【摘要】目的觀察五氯酚鈉對小鼠細胞免疫、體液免疫和巨噬細胞功能的毒性作用。方法將五氯酚鈉以25，50和100mg/kg經(jīng)灌胃方式一次給予小鼠，然后觀察給藥后3，24和48h小鼠各項免疫功能的變化，采用T淋巴細胞增殖法測定細胞免疫功能，采用B淋巴細胞增殖法測定體液免疫功能，采用巨噬細胞吞噬能力和分泌NO的能力來測定巨噬細胞功能。結果100mg/kg五氯酚鈉染毒后3h，小鼠的脾臟和胸腺相對重量較對照組降低，脾臟B淋巴細胞的增殖能力受到抑制，腹腔巨噬細胞的吞噬功能和NO生成能力受到

2、抑制。25和50mg/kg五氯酚鈉在染毒后24h依然對脾細胞中B淋巴細胞增殖能力產(chǎn)生抑制作用。這種抑制效應到48h時完全消失。結論五氯酚鈉一次染毒在25～100mg/kg劑量范圍內(nèi)對小鼠體液免疫和細胞免疫功能產(chǎn)生抑制作用，100mg/kg對巨噬細胞功能產(chǎn)生抑制作用，對細胞免疫功能未見影響?！娟P鍵詞】五氯酚鈉　五氯酚鈉(又稱滅釘螺藥，PCP-Na)是在世界范圍被廣泛使用的一種農(nóng)藥，由于大面積推廣，引起了一定的環(huán)境污染，對人類健康造成影響〔1，2〕。Lang等〔3〕利用人淋巴細胞在體外接觸五氯酚研究中發(fā)現(xiàn)，無論工業(yè)品

3、還是分析純五氯酚在10～40μmol/L濃度下與淋巴細胞共同孵育8d，對于IgG和IgM抗體的產(chǎn)生量均有明顯的抑制作用。Daniel等〔4〕在人群研究中發(fā)現(xiàn)，血液中五氯酚濃度的升高能夠?qū)е耇細胞功能障礙。體外研究表明，5mg/L以上的五氯酚能夠抑制克鯉魚和港灣魚的巨噬細胞和嗜酸性細胞殺菌活性〔5〕。目前的研究基本上以五氯酚為主，盡管五氯酚鈉與五氯酚的代謝途徑類似，但其毒性表現(xiàn)是否一致仍需要進一步探索。本研究采用五氯酚鈉一次性染毒小鼠，觀察染毒后不同時間小鼠免疫功能的變化。　　1材料與方法　　11實驗動物清潔級I

4、CR雌性小鼠150只(北京大學醫(yī)學部實驗運動科學部)；體重20～24g，雌性，動物合格證號：SCXK(京)2002-0001。動物飼養(yǎng)室溫，20～25℃，動物進食標準基礎飼料，自由飲用自來水。　　12主要試劑五氯酚鈉(國產(chǎn)，分析純，sodiumpentachlorophenate)；四甲基偶氮噻唑藍(MTT)，刀豆蛋白A(ConA)，脂多糖(LPS，美國Sigma公司)；RPMI1640完全培養(yǎng)液，Hanks液等?！　?3動物染毒和處理將小鼠隨機分為4組，每組5只。分別為對照組(蒸餾水)，25，50和100m

5、g/kg組。將五氯酚鈉一次性以灌胃方式染毒，分別在小鼠染毒后3，24和48h，處死小鼠，取出臟器，剔除結締組織和脂肪，吸凈殘留血液，稱重，進行各項指標測定。　　14T淋巴細胞增殖處死小鼠，無菌取脾，制備成單個細胞懸液，然后將細胞數(shù)調(diào)整至2×106個/ml。將每份細胞懸液分2孔加入24孔板，每孔1ml，其中一孔作為對照，另一孔加入20μlConA(400μg/ml)做為刺激孔，將細胞放入5%CO2，37℃培養(yǎng)箱中孵育68h，取出加入MTT(5mg/kg)50μl/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h，棄上清，每孔加入1ml酸性異丙醇

6、，吹打均勻，在酶標儀上570nm波長下比色?！　?5淋巴細胞增殖方法同T淋巴細胞增值，所用刺激物為25μlLPS(400μg/ml)?！　?6巨噬細胞吞噬功能處死小鼠后將RPMI1640完全培養(yǎng)液2ml，注入小鼠腹腔，收集灌洗的液體，調(diào)整細胞數(shù)至５×１０４個/ml，將細胞懸液加入96孔培養(yǎng)板，每孔100μl。將巨噬細胞置入5%CO2，37℃培養(yǎng)箱中孵育2h，取出后棄上清，加入用RPMI1640完全培養(yǎng)液稀釋的中性紅(50μg/ml)100μl，再置于5%CO2，37℃培養(yǎng)箱中孵育30min，取出96孔板，棄上

7、清，每孔加入150μl沖洗液，沖洗后棄去。再加入100μl溶解液，在721分光光度計上540nm波長下比色?！　?7巨噬細胞產(chǎn)生NO測定巨細胞收集同巨噬細胞吞噬功能測定，收集細胞后，將細胞調(diào)整至１×１０６個/ml，加入24孔培養(yǎng)板，每孔1ml，放入5%CO2，37℃培養(yǎng)箱中孵育2h，取出后棄上清，每孔重新加入1mlRPMI1640完全培養(yǎng)液，同時加入LPS(終濃度5μg/ml)，繼續(xù)培養(yǎng)24h，收集培養(yǎng)上清，用1ml培養(yǎng)上清與1mlGrEiss試劑混勻，于540nm波長下比色。同時用亞硝酸鈉配制標準曲線，計算培

8、養(yǎng)上清中亞硝酸鹽氮含量。　　18統(tǒng)計分析采用SPSS統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析?！　?結果　　21一般狀況　　211不同劑量的五氯酚鈉一次染毒3h對小鼠器官變化的影響(表1)一次染毒3h后，100mg/kg五氯酚鈉劑量組小鼠的脾臟和胸腺相對重量明顯降低，與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義，而肝臟和腎臟相對重量與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義。50和25mg/kg五氯酚鈉劑量