五氯酚鈉急性染毒對小鼠免疫細(xì)胞損傷影響

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1、五氯酚鈉急性染毒對小鼠免疫細(xì)胞損傷影響【摘要】目的觀察五氯酚鈉對小鼠細(xì)胞免疫、體液免疫和巨噬細(xì)胞功能的毒性作用。方法將五氯酚鈉以25，50和100mg/kg經(jīng)灌胃方式一次給予小鼠，然后觀察給藥后3，24和48h小鼠各項(xiàng)免疫功能的變化，采用T淋巴細(xì)胞增殖法測定細(xì)胞免疫功能，采用B淋巴細(xì)胞增殖法測定體液免疫功能，采用巨噬細(xì)胞吞噬能力和分泌NO的能力來測定巨噬細(xì)胞功能。結(jié)果100mg/kg五氯酚鈉染毒后3h，小鼠的脾臟和胸腺相對重量較對照組降低，脾臟B淋巴細(xì)胞的增殖能力受到抑制，腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能和NO生成能力受到

2、抑制。25和50mg/kg五氯酚鈉在染毒后24h依然對脾細(xì)胞中B淋巴細(xì)胞增殖能力產(chǎn)生抑制作用。這種抑制效應(yīng)到48h時(shí)完全消失。結(jié)論五氯酚鈉一次染毒在25～100mg/kg劑量范圍內(nèi)對小鼠體液免疫和細(xì)胞免疫功能產(chǎn)生抑制作用，100mg/kg對巨噬細(xì)胞功能產(chǎn)生抑制作用，對細(xì)胞免疫功能未見影響?！娟P(guān)鍵詞】五氯酚鈉　五氯酚鈉(又稱滅釘螺藥，PCP-Na)是在世界范圍被廣泛使用的一種農(nóng)藥，由于大面積推廣，引起了一定的環(huán)境污染，對人類健康造成影響〔1，2〕。Lang等〔3〕利用人淋巴細(xì)胞在體外接觸五氯酚研究中發(fā)現(xiàn)，無論工業(yè)品

3、還是分析純五氯酚在10～40μmol/L濃度下與淋巴細(xì)胞共同孵育8d，對于IgG和IgM抗體的產(chǎn)生量均有明顯的抑制作用。Daniel等〔4〕在人群研究中發(fā)現(xiàn)，血液中五氯酚濃度的升高能夠?qū)е耇細(xì)胞功能障礙。體外研究表明，5mg/L以上的五氯酚能夠抑制克鯉魚和港灣魚的巨噬細(xì)胞和嗜酸性細(xì)胞殺菌活性〔5〕。目前的研究基本上以五氯酚為主，盡管五氯酚鈉與五氯酚的代謝途徑類似，但其毒性表現(xiàn)是否一致仍需要進(jìn)一步探索。本研究采用五氯酚鈉一次性染毒小鼠，觀察染毒后不同時(shí)間小鼠免疫功能的變化?！　?材料與方法　　11實(shí)驗(yàn)動物清潔級I

4、CR雌性小鼠150只(北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)運(yùn)動科學(xué)部)；體重20～24g，雌性，動物合格證號：SCXK(京)2002-0001。動物飼養(yǎng)室溫，20～25℃，動物進(jìn)食標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)飼料，自由飲用自來水。　　12主要試劑五氯酚鈉(國產(chǎn)，分析純，sodiumpentachlorophenate)；四甲基偶氮噻唑藍(lán)(MTT)，刀豆蛋白A(ConA)，脂多糖(LPS，美國Sigma公司)；RPMI1640完全培養(yǎng)液，Hanks液等?！　?3動物染毒和處理將小鼠隨機(jī)分為4組，每組5只。分別為對照組(蒸餾水)，25，50和100m

5、g/kg組。將五氯酚鈉一次性以灌胃方式染毒，分別在小鼠染毒后3，24和48h，處死小鼠，取出臟器，剔除結(jié)締組織和脂肪，吸凈殘留血液，稱重，進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)測定?！　?4T淋巴細(xì)胞增殖處死小鼠，無菌取脾，制備成單個細(xì)胞懸液，然后將細(xì)胞數(shù)調(diào)整至2×106個/ml。將每份細(xì)胞懸液分2孔加入24孔板，每孔1ml，其中一孔作為對照，另一孔加入20μlConA(400μg/ml)做為刺激孔，將細(xì)胞放入5%CO2，37℃培養(yǎng)箱中孵育68h，取出加入MTT(5mg/kg)50μl/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h，棄上清，每孔加入1ml酸性異丙醇

6、，吹打均勻，在酶標(biāo)儀上570nm波長下比色?！　?5淋巴細(xì)胞增殖方法同T淋巴細(xì)胞增值，所用刺激物為25μlLPS(400μg/ml)?！　?6巨噬細(xì)胞吞噬功能處死小鼠后將RPMI1640完全培養(yǎng)液2ml，注入小鼠腹腔，收集灌洗的液體，調(diào)整細(xì)胞數(shù)至５×１０４個/ml，將細(xì)胞懸液加入96孔培養(yǎng)板，每孔100μl。將巨噬細(xì)胞置入5%CO2，37℃培養(yǎng)箱中孵育2h，取出后棄上清，加入用RPMI1640完全培養(yǎng)液稀釋的中性紅(50μg/ml)100μl，再置于5%CO2，37℃培養(yǎng)箱中孵育30min，取出96孔板，棄上

7、清，每孔加入150μl沖洗液，沖洗后棄去。再加入100μl溶解液，在721分光光度計(jì)上540nm波長下比色?！　?7巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO測定巨細(xì)胞收集同巨噬細(xì)胞吞噬功能測定，收集細(xì)胞后，將細(xì)胞調(diào)整至１×１０６個/ml，加入24孔培養(yǎng)板，每孔1ml，放入5%CO2，37℃培養(yǎng)箱中孵育2h，取出后棄上清，每孔重新加入1mlRPMI1640完全培養(yǎng)液，同時(shí)加入LPS(終濃度5μg/ml)，繼續(xù)培養(yǎng)24h，收集培養(yǎng)上清，用1ml培養(yǎng)上清與1mlGrEiss試劑混勻，于540nm波長下比色。同時(shí)用亞硝酸鈉配制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算培

8、養(yǎng)上清中亞硝酸鹽氮含量?！　?8統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析。　　2結(jié)果　　21一般狀況　　211不同劑量的五氯酚鈉一次染毒3h對小鼠器官變化的影響(表1)一次染毒3h后，100mg/kg五氯酚鈉劑量組小鼠的脾臟和胸腺相對重量明顯降低，與對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而肝臟和腎臟相對重量與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。50和25mg/kg五氯酚鈉劑量