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《cm4-hsbaff基因在大腸桿菌中表達及生物學活性的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、南京師范大學碩士學位論文CM4-hsBAFF基因在大腸桿菌中的表達及生物學活性研究姓名：劉海峰申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：張雙全;劉平20080101中文摘要摘要抗菌肽是生物細胞體內特定基因編碼的一類小分子多肽，也是宿主防御病原微生物入侵的重要分子屏障，其生成和釋放是機體炎癥反應的重要組成部分?？咕腃M4不僅對革蘭氏陰性細菌和革蘭氏陽性細菌有高效廣譜的殺菌能力，而且對某些病毒、真菌和原蟲也具有抑殺作用；同時它還●．對某些腫瘤細胞具有選擇性的殺傷作用，而對正常哺乳動物和昆蟲的細胞
2、卻無明顯的抑殺作用。B淋巴細胞刺激因子(BAFF)是腫瘤壞死因子(n旺)超家族的成員，BAFF對活化的B細胞有強烈的促進增殖和分化的刺激作用，在免疫細胞的信號網絡中具有重要的調控作用。利用抗菌肽CM4能殺傷病原微生物和BAFF能促進B細胞增殖以及分泌抗體的功能，擬實現(xiàn)融合蛋白對病原體的雙重抑制作用，因此本實驗利用基因重組技術，將抗菌肽CM4和hsBAFF的融合基因定向插入原核表達載體pET28a和pET30a，構建了融合基因的兩種原核表達載體pET28a／CM4．hsBAFF和pET30WCM4-hsBA
3、FF，并將兩種原核表達載體轉化入大腸桿菌BL21(DE3)PlysS中，通過實驗摸索確定了兩種融合蛋白表達的最佳溫度和IPTG濃度，在宿主菌中獲得高效表達，表達產物經Ni2+-IDA親和層析和SephardexG．75凝膠過濾層析方法來純化獲得目的蛋白。經鑒定，融合蛋白具有抗菌活性和刺激B淋巴細胞增殖的生物學活性，該技術可以制備具有兩種不同功能的活性蛋白。關鍵詞：抗菌肽CM4；B淋巴細胞刺激因子；基因克??；融合蛋白AbstractAntibacterialpeptideisakindofsmallsize
4、molecularpolypeptidethatisencodedbyaspecialgeneincell，stillisimportantmolecularprotectivescreenofthehostdefendpathogenicbacteriainvaders．Theproductionandreleaseofthiskindofpolypeptideistheingredientoftheinflammatoryreaction．TheantibacterialCM4hasbroadspec
5、trumofantibacterialeffectsonGram·negativebacteriumandGram-positivebacterium．Itkillsomevirus，fungusandprotozoon．Itcanalsokillsomecancerceilsselectively，butnotnormalcells．TheBlymphocytestimulator(BAFF)isanovelmemberofthetumornecrosisfactor口NF)ligandfamilywh
6、ichisimportantinBlymphocytematurationandsurvival．BAFFplaysacriticalroleinregulatingBcellimmuneresponses．ThefusionproteincaninhibitthemicroorganismstoutilizethefunctionsofABP—CM4CankillpathogenicmicroorganismsandBAFFCanpromoteBlymphocyteproliferationandsec
7、reteantibodies，SOthehumansolubleBlymphocytestimulatoractivingfactor(hsBAFF)genewasfusedtothesequenceencodingantibacterialpeptideCM4toconstructanexpressionvectorspET28a／CM4-hsBAFFandpET30a／CM4-hsBAFF．TherecombinantexpressionplasmidsweretransformedintoBL21(
8、DE3)PlysS，thenexpressedthefusionproteinintheoptimalconditionsandobtainedhighlyyield．TherecombinantproteinswerepurifiedbyNi2+．IDAandSephardex(}-75，andtestedtheantbacterialactivityandtheactivitytoBcellproliferationinv
