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《β-乳球蛋白抗原表位譜的解析與關(guān)鍵抗原表位串聯(lián)體的重組表達(dá)與鑒定》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文最主要表位的氨基酸序列為AA76-95、AA1-20、AA106-125，主要表位的氨基酸序列為AA91-110、AA61-81、AA121-140，次要表位的氨基酸序列為AA46-65、AA31-50、AA151-162。（2）β-乳球蛋白關(guān)鍵抗原表位串聯(lián)體重組蛋白的表達(dá)及鑒定：通過DNAStar軟件對(duì)理論上6種組合方式進(jìn)行了分析，得到最佳組合方式，成功構(gòu)建了大腸桿菌原核表達(dá)載體，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后，獲得大小為36kDa左右的融合蛋白，并純化得到單一組分的36kDa大小的重組蛋白，并經(jīng)免疫印
2、跡法、斑點(diǎn)印跡法鑒定其免疫活性，并利用重組蛋白作為檢測抗原建立了一種活性氧傳遞均相發(fā)光免疫測定技術(shù)來檢測血清sIgE。結(jié)論：本研究對(duì)牛奶主要過敏原β-乳球蛋白的抗原表位進(jìn)行了解析，不同牛奶過敏患者血清所識(shí)別的抗原表位具有異質(zhì)性。成功表達(dá)了β-乳球蛋白關(guān)鍵抗原表位串聯(lián)體重組蛋白，并鑒定了關(guān)鍵抗原串聯(lián)體重組蛋白具有良好的免疫學(xué)活性，在檢測牛奶過敏疾病中有可能代替天然抗原，為新一代診斷試劑的制備奠定基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：牛奶過敏β-乳球蛋白特異性IgE抗原表位重組表達(dá)II萬方數(shù)據(jù)天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文AbstractObject
3、ive:SerumspecificIgEisacommonmeansofdiagnosisoffoodallergy,StandardizationofknownantigenistheimportantpreconditionfordevelopmentofspecificIgEinvitrodiagnosticreagentsandthedevelopmentoffoodcomponentsofantigenepitoperecombinantisanimportantmeasuretosolvethestand
4、ardizationofantigen.Inthisstudy,themostimportantmilkallergen"β-lactoglobulin"asanexample,startingfromtheanalysisofitsepitopes,andanalyzetheimportantantigenepitopeandthepatientsserumsIgEresponsefrequency,thustoselectkeyepitopesandbuildkeyepitopesrecombinantandtr
5、ythepossibilityofusingepitoperecombinantproteininsteadofnaturalprotein.Methods:(1)β-lactoglobulinkeyepitopesscreeningandserumheterogeneityanalysis:First,intheNCBIdatabasesearchedmilkallergensβ-lactoglobulinaminoacidsequence(162aminoacids),thenentrustedGL(Shangh
6、ai)BiochemLtdsynthesisantigenepitopesbytheendoftheoverlap.20aminoacidsofapolypeptide,twoadjacentoverlappingpeptidesof5aminoacids;ThepolypeptidepointedonnitrocellulosemembraneandthespecificIgEinmilkallergypatientsserumasa"probe".Toobservepolypeptideresponsefrequ
7、encydifferencebetweenpatientswithmilkallergyandpeptideidentificationbyanydifferencesbetweendifferentindividuals.(2)β-lactoglobulinkeyantigenepitoperecombinanttandemofbuildinganditspreliminaryapplicationresearch:Thehighestresponsefrequencyofthreepolypeptideexpre
8、ssedinseries,betweenadjacenttwopeptidesdojointwithaglycine.FirstusingDNAstarbioinformaticssoftwaretoforecastthreetablesof6kindsofcombinationandselectingthebestcombination;Th
