遲緩愛德華氏菌抗原蛋白FBA在畢赤酵母中的重組表達(dá)及抗原表位篩選.pdf

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1、ｔ程賴±學(xué)位論受ｉ論文題目：遲緩愛德華厭菌抗原蛋白ＦＢＡ在畢赤酵母中的重組表達(dá)及抗原表位篩選二工程領(lǐng)域；二勺海洋輸學(xué)ｉ研究方向：．鮑盼瑞？ｉ論義作者吳海珍副教授學(xué)校導(dǎo)航ＩＩ－－繆賄高級工程師企業(yè)導(dǎo)師．．＂；稱‘＾詞．；；＞？．Ｊ馬２０１５０４２１定稿日期：年月日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部口或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)華東理工大學(xué)可將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，

2、可Ｗ采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文。保密論文在解密后遵守此規(guī)定。論；密情況：＾／因不保密□?；肀Ｃ芷冢耆罩聊辏崳姡撸咴拢撸撸撸咴拢呷諏W(xué)位論文作者簽名：指導(dǎo)老師簽名；日期；年誠月讀日日期；年ｒ月曰＞￥：Ｊ嗦分類號：密級：ＵＤＣ：華東理工大學(xué)工程碩±學(xué)位論文遲緩愛德華氏茵抗原蛋白ＦＢＡ在畢赤醇母中的重組表達(dá)及抗原表位篩選鮑盼指導(dǎo)教師姓名：吳海珍副教授華東理工大學(xué)－－生物申請學(xué)位級別；碩±工程領(lǐng)ｍ工程論文定稿日期；２０１５．０４．２１論文答辯日期：２０１５．０５．２５學(xué)位授

3、予單位：華東理工大學(xué)學(xué)位授予日期：答辯委員會主席：圧英萍評閩人：王啟要周葫明作者聲明我鄭重聲明：。本人恪守學(xué)術(shù)道德，崇尚嚴(yán)謹(jǐn)學(xué)風(fēng)所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的結(jié)果。除文中明確注明和引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫，并對所寫內(nèi)容負(fù)責(zé)。論文作者簽名：年４月》《曰。）咬華東理王大學(xué)碩±學(xué)位論文第Ｉ頁遲緩愛德華巧菌抗原蛋白ＦＢＡ在畢赤薛母中的重狙表達(dá)及抗原表位篩選摘要遲緩愛德華氏菌是海水養(yǎng)殖魚類的主要致病菌，屬胞內(nèi)寄生菌，傳統(tǒng)抗生素難Ｗ防治，

4、本實(shí)驗(yàn)室致力于研究其致病機(jī)制和疫苗的開發(fā)。前期研究發(fā)現(xiàn)，通過大腸桿菌重組１６－二表達(dá)該病原菌的持家酶果糖，，憐酸醒縮酶ｆＢＡ）免疫斑馬魚和大菱巧后，對＆／Ｖ１Ｗ波姑／ａｆ口Ｗａ均具有較好的免疫保護(hù)為，是愛德華氏菌病亞單位疫苗開發(fā)的優(yōu)良候選抗原。使用大腸桿菌進(jìn)行重組表達(dá)會產(chǎn)生內(nèi)毒素。本文將抗原蛋白ＦＢＡ在畢赤酵母中進(jìn)行重組表達(dá)，Ｗ期避免內(nèi)毒素問題并且實(shí)現(xiàn)抗原蛋白ＦＢＡ大規(guī)模制備，進(jìn)而將其應(yīng)用。本工作完成Ｔ重組表達(dá)ＦＢＡ的畢赤醇母菌株ＧＳ－于水產(chǎn)養(yǎng)殖新型疫苗開發(fā)中１１５Ｐ－ＩＣ化：ａ和ＧＳ１１５ｐＧＡＰＺａＡ：ｋ？的構(gòu)建，搖瓶培養(yǎng)條件下檢測甲醇誘導(dǎo)型重組畢

5、赤ｐ訴；／－Ｓ１１５ＰＩＣ９Ｋ酵母ＧＰ：辦口對ＦＢＡ蛋白的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)經(jīng)甲醇誘導(dǎo)后重組ＦＢＡ能被成－Ｐ功誘導(dǎo)表達(dá)。隨后將ＧＳ１１５ＰＩＣ９Ｋ：聽ａ經(jīng)５Ｌ發(fā)酵罐培養(yǎng)，發(fā)酵液上清中ＦＢＡ的濃度可達(dá)１．０６ｇ／Ｌ，并通過鎮(zhèn)柱親和層析完成了其純化。對純化后的重組ＦＢＡ進(jìn)行免疫效果評價(jià)，其免疫斑馬魚和大菱鮮后均具有較好的免疫保護(hù)效力。并且重組酵母表達(dá)的ＦＢＡＦＢＡ—樣和重組大腸桿菌表達(dá)的，也能與免疫ＦＢＡ的大菱鮮抗血清產(chǎn)生明顯的反應(yīng)。上述結(jié)果表明畢赤酵母表達(dá)的抗原蛋白ＦＢＡ也具有較好的免疫原性，為后續(xù)ＦＢＡ的規(guī)模化制備及其亞單位疫苗的開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。ＦＢ

6、Ａ蛋白在眾多細(xì)菌中具有較高的同源性，篩選得到ＦＢＡ的抗原表位可為多病原感染的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)提供新型疫苗設(shè)計(jì)的靴點(diǎn)。本文對遲緩愛德華氏菌的ＦＢＡ進(jìn)行了抗原表位的初步篩選。首先通過表位預(yù)測ＢｅｉＰｒｅｄ１．化軟件在線預(yù)測了ＦＢＡ抗原表位可ｐ能的氨基酸位點(diǎn)。其次構(gòu)建了八個(gè)框內(nèi)部分缺失的ＡＦＢＡ蛋白大腸桿菌表達(dá)菌株并對其進(jìn)行了表達(dá)與純化。之后免疫斑馬魚后比較了這八個(gè)蛋白免疫保護(hù)力。最后將這八個(gè)框內(nèi)缺失的ＡＦＢＡ蛋白包被９６孔板，Ｗ免疫陽Ａ的大菱鮮抗血清進(jìn)行化ＩＳＡ檢測。由Ｓ？方面結(jié)果分析得出，ＦＢＡ蛋白的１８１２４０位氨基酸對其免疫保護(hù)效力貢獻(xiàn)最顯著，可能是抗原

7、關(guān)鍵表位膚存在的區(qū)域。關(guān)鍵詞：遲緩愛德華氏菌；ＦＢＡ；畢赤酵母重組表達(dá)抗原表位；；第ＩＩ頁華東理工欠學(xué)碩±學(xué)位論文ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＰｉｃｈｉａａｓｔｏｒｉｓａｎｄＥｉｔｏｅＳｃｒｅｅｎｉｎｏｆＡｎｔｉｅｎＰｒｏｔｅｉｎＦＢＡｐｐｐｇｇ石ｒｏｍＥｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ細(xì)ｒｄａＡｂｓｔｒａｃｔＥｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａｔａｒｄａｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｍｏｓｔｉｍｐｏｒｔａｎｔａｔｈｏｅｎｓｏｆｍａｒｉ