遲緩愛德華氏菌抗原蛋白FBA在畢赤酵母中的重組表達及抗原表位篩選.pdf

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1、ｔ程賴±學位論受ｉ論文題目：遲緩愛德華厭菌抗原蛋白ＦＢＡ在畢赤酵母中的重組表達及抗原表位篩選二工程領域；二勺海洋輸學ｉ研究方向：．鮑盼瑞？ｉ論義作者吳海珍副教授學校導航ＩＩ－－繆賄高級工程師企業(yè)導師．．＂；稱‘＾詞．；；＞？．Ｊ馬２０１５０４２１定稿日期：年月日學位論文使用授權聲明本學位論文作者完全了解學校有關保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留并向國家有關部口或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權華東理工大學可將本學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，

2、可Ｗ采用影印、縮印或掃描等復制手段保存和匯編學位論文。保密論文在解密后遵守此規(guī)定。論；密情況：＾／因不保密□?；肀Ｃ芷冢耆罩聊辏崳姡撸咴拢撸撸撸咴拢呷諏W位論文作者簽名：指導老師簽名；日期；年誠月讀日日期；年ｒ月曰＞￥：Ｊ嗦分類號：密級：ＵＤＣ：華東理工大學工程碩±學位論文遲緩愛德華氏茵抗原蛋白ＦＢＡ在畢赤醇母中的重組表達及抗原表位篩選鮑盼指導教師姓名：吳海珍副教授華東理工大學－－生物申請學位級別；碩±工程領ｍ工程論文定稿日期；２０１５．０４．２１論文答辯日期：２０１５．０５．２５學位授

3、予單位：華東理工大學學位授予日期：答辯委員會主席：圧英萍評閩人：王啟要周葫明作者聲明我鄭重聲明：。本人恪守學術道德，崇尚嚴謹學風所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的結果。除文中明確注明和引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫，并對所寫內(nèi)容負責。論文作者簽名：年４月》《曰。）咬華東理王大學碩±學位論文第Ｉ頁遲緩愛德華巧菌抗原蛋白ＦＢＡ在畢赤薛母中的重狙表達及抗原表位篩選摘要遲緩愛德華氏菌是海水養(yǎng)殖魚類的主要致病菌，屬胞內(nèi)寄生菌，傳統(tǒng)抗生素難Ｗ防治，

4、本實驗室致力于研究其致病機制和疫苗的開發(fā)。前期研究發(fā)現(xiàn)，通過大腸桿菌重組１６－二表達該病原菌的持家酶果糖，，憐酸醒縮酶ｆＢＡ）免疫斑馬魚和大菱巧后，對＆／Ｖ１Ｗ波姑／ａｆ口Ｗａ均具有較好的免疫保護為，是愛德華氏菌病亞單位疫苗開發(fā)的優(yōu)良候選抗原。使用大腸桿菌進行重組表達會產(chǎn)生內(nèi)毒素。本文將抗原蛋白ＦＢＡ在畢赤酵母中進行重組表達，Ｗ期避免內(nèi)毒素問題并且實現(xiàn)抗原蛋白ＦＢＡ大規(guī)模制備，進而將其應用。本工作完成Ｔ重組表達ＦＢＡ的畢赤醇母菌株ＧＳ－于水產(chǎn)養(yǎng)殖新型疫苗開發(fā)中１１５Ｐ－ＩＣ化：ａ和ＧＳ１１５ｐＧＡＰＺａＡ：ｋ？的構建，搖瓶培養(yǎng)條件下檢測甲醇誘導型重組畢

5、赤ｐ訴；／－Ｓ１１５ＰＩＣ９Ｋ酵母ＧＰ：辦口對ＦＢＡ蛋白的表達情況，發(fā)現(xiàn)經(jīng)甲醇誘導后重組ＦＢＡ能被成－Ｐ功誘導表達。隨后將ＧＳ１１５ＰＩＣ９Ｋ：聽ａ經(jīng)５Ｌ發(fā)酵罐培養(yǎng)，發(fā)酵液上清中ＦＢＡ的濃度可達１．０６ｇ／Ｌ，并通過鎮(zhèn)柱親和層析完成了其純化。對純化后的重組ＦＢＡ進行免疫效果評價，其免疫斑馬魚和大菱鮮后均具有較好的免疫保護效力。并且重組酵母表達的ＦＢＡＦＢＡ—樣和重組大腸桿菌表達的，也能與免疫ＦＢＡ的大菱鮮抗血清產(chǎn)生明顯的反應。上述結果表明畢赤酵母表達的抗原蛋白ＦＢＡ也具有較好的免疫原性，為后續(xù)ＦＢＡ的規(guī)?；苽浼捌鋪唵挝灰呙绲拈_發(fā)奠定了基礎。ＦＢ

6、Ａ蛋白在眾多細菌中具有較高的同源性，篩選得到ＦＢＡ的抗原表位可為多病原感染的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)提供新型疫苗設計的靴點。本文對遲緩愛德華氏菌的ＦＢＡ進行了抗原表位的初步篩選。首先通過表位預測ＢｅｉＰｒｅｄ１．化軟件在線預測了ＦＢＡ抗原表位可ｐ能的氨基酸位點。其次構建了八個框內(nèi)部分缺失的ＡＦＢＡ蛋白大腸桿菌表達菌株并對其進行了表達與純化。之后免疫斑馬魚后比較了這八個蛋白免疫保護力。最后將這八個框內(nèi)缺失的ＡＦＢＡ蛋白包被９６孔板，Ｗ免疫陽Ａ的大菱鮮抗血清進行化ＩＳＡ檢測。由Ｓ？方面結果分析得出，ＦＢＡ蛋白的１８１２４０位氨基酸對其免疫保護效力貢獻最顯著，可能是抗原

7、關鍵表位膚存在的區(qū)域。關鍵詞：遲緩愛德華氏菌；ＦＢＡ；畢赤酵母重組表達抗原表位；；第ＩＩ頁華東理工欠學碩±學位論文ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＰｉｃｈｉａａｓｔｏｒｉｓａｎｄＥｉｔｏｅＳｃｒｅｅｎｉｎｏｆＡｎｔｉｅｎＰｒｏｔｅｉｎＦＢＡｐｐｐｇｇ石ｒｏｍＥｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ細ｒｄａＡｂｓｔｒａｃｔＥｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａｔａｒｄａｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｍｏｓｔｉｍｐｏｒｔａｎｔａｔｈｏｅｎｓｏｆｍａｒｉ