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《rpr、elisa和pcr三種梅毒檢測(cè)方法在獻(xiàn)血篩檢中的應(yīng)用效果評(píng)價(jià)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、四川大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師丁顯平教授指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人己發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得四川大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。．本學(xué)位論文成果是本人在四川大學(xué)讀書期間在導(dǎo)師指導(dǎo)下取得的，論文成果歸四川I大學(xué)所有，特此聲明。導(dǎo)師簽名：研究生簽名：砷尹}舒四川大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文RPR、ELlsA和PCR三種梅毒檢測(cè)方法在獻(xiàn)血篩檢中的應(yīng)用效果評(píng)價(jià)碩士研究生
2、：李文導(dǎo)師：丁顯平教授四川大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院遺傳醫(yī)學(xué)研究所摘要梅毒(syphilis)是危害人類健康較為嚴(yán)重的一種性傳播疾病，近年來(lái)，我國(guó)的梅毒發(fā)病率呈逐漸上升趨勢(shì)。梅毒的病原體屬于密螺旋體屬蒼白螺旋體(Treponemapallidum，TP)的蒼白亞種，又稱梅毒螺旋體。人是梅毒的唯一傳染源。梅毒有先天性和獲得性兩種。先天性梅毒(又稱胎傳梅毒)是梅毒螺旋體通過(guò)胎盤傳染胎兒，早期可致胎兒流產(chǎn)、早產(chǎn)，晚期感染的成活胎兒可能患先天梅毒。獲得性梅毒主要經(jīng)性接觸傳播，接吻、手術(shù)、哺乳、輸血、接觸污染物也可被傳染。獲得性梅毒在臨床上分為三期：一期梅毒、二期梅毒和三期梅毒。人體感染梅
3、毒螺旋體后，可產(chǎn)生特異性抗梅毒螺旋體抗體和非特異性抗心磷脂(cardiolipin)抗體。特異性抗梅毒螺旋體主要有IgM、IgG抗體，IgM抗體持續(xù)時(shí)間短，IgG抗體卻持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，甚至可終生存在，但抗體濃度較低，一般不能預(yù)防再感染。非特異性抗心磷脂抗體又稱反應(yīng)素，是由梅毒螺旋體破壞的組織細(xì)胞所釋放的類脂樣物質(zhì)以及梅毒螺旋體自身的類脂和脂蛋白刺激機(jī)體產(chǎn)生的IgM和IgG抗體。這種抗體也可在非梅毒螺旋體感染的多種急、慢性疾病患者的血清中檢出。特異性抗梅毒螺旋體抗體比非特異性抗心磷脂抗體出現(xiàn)得早，即使經(jīng)過(guò)正規(guī)抗梅毒治療，抗梅毒螺旋體抗體仍持續(xù)存在，甚至可終生存在。對(duì)梅毒進(jìn)行早
4、診斷、早治療對(duì)于控制其蔓延至關(guān)重要。而選擇敏感性高、特異性強(qiáng)的梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法將十分有助于梅毒的診斷。目前，梅毒檢測(cè)的常用方法主要有：快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)(rapidplasmareagincirclecardtest，RPR)、甲苯胺紅快速反四川大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文應(yīng)素試驗(yàn)(toluidineredunheated-serumtest，TRUST)、梅毒螺旋體ELISA試驗(yàn)(enzyme1inkedimmunosorbentassay，ELISA)、梅毒螺旋體血凝試驗(yàn)(treponemapallidumhemagglutinationassay，TPHA)和梅毒螺旋
5、體顆粒凝集試驗(yàn)(treponemapallidumparticleagglutination，TPPA)等，有時(shí)也用到免疫印跡法和PCR(Polymerasechainreaction，PCR)方法。我國(guó)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，獻(xiàn)血者梅毒試驗(yàn)必須陰性，使用的梅毒檢測(cè)方法可以是RPR法、TRUST法或ELISA法。因此，在獻(xiàn)血篩檢中，選擇使用敏感而特異的梅毒檢測(cè)方法，對(duì)于提高血液質(zhì)量、防止經(jīng)輸血傳播梅毒、保證輸血安全具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。本實(shí)驗(yàn)擬在獻(xiàn)血篩檢中建立起梅毒的RPR半自動(dòng)檢測(cè)方法、ELISA全自動(dòng)檢測(cè)方法、TPPA和熒光定量PCR的手工檢測(cè)方法；用這四種方法對(duì)獻(xiàn)血者血
6、液標(biāo)本進(jìn)行梅毒檢測(cè)；分析檢測(cè)結(jié)果，評(píng)價(jià)檢測(cè)方法，選擇最適合血站進(jìn)行大規(guī)模血液篩檢的梅毒檢測(cè)方法。材料與方法1、研究對(duì)象：本實(shí)驗(yàn)收集成都市血液中心2006年lO月上旬至2007年2月上旬采集的，在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的健康征詢和健康檢查中均合格的自愿無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本32327份，用EDTA抗凝。梅毒抗體室內(nèi)質(zhì)控品用作室內(nèi)質(zhì)控。2、實(shí)驗(yàn)方法：利用ATplus2全自動(dòng)加樣器及其SUNRISEplus用戶軟件、FAME24／20全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀及其用戶軟件、itswell血液檢驗(yàn)質(zhì)量控制與管理軟件，建立了ELISA全自動(dòng)檢測(cè)方法。利用TECANRSP150全自動(dòng)加樣器建立了RPR
7、自動(dòng)加樣方法，利用KJ一201BD型振蕩器建立了RPR手工檢測(cè)方法。利用Heidolph微板振蕩器、背光式讀片燈等建立了TPPA檢測(cè)方法。利用FTC-2000型熒光定量PCR儀建立了熒光定量PCR檢測(cè)方法。同時(shí)使用RPR法和ELISA法，對(duì)32327份獻(xiàn)血者血液標(biāo)本作了梅毒檢測(cè)，對(duì)任意一種方法檢測(cè)出的陽(yáng)性標(biāo)本，再使用TPPA法和熒光定量PCR法進(jìn)行檢測(cè)。分析檢測(cè)結(jié)果，評(píng)價(jià)檢測(cè)方法。統(tǒng)計(jì)方法：x2檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、RPR、ELISA、TPPA和熒光定量PCR四種梅毒檢測(cè)方法的建立成功建立了自動(dòng)加樣、自動(dòng)檢測(cè)的梅毒ELISA檢測(cè)方法，自動(dòng)加樣
