胰島素對胰島β細胞的影響及其機制研究

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1、上海交通大學醫(yī)學院2．005級博士學位論文胰島素對胰島細胞的影響及其機制研究摘要：近年來的研究發(fā)現大多數2型糖尿病患者在發(fā)病初期已出現胰島素，的早期相分泌缺陷；反映其島p細胞功能已出現障礙，若及時治療則能夠部分或完全地恢復其胰島功能。另有研究者發(fā)現胰島素具有自分泌作用，且胰島p細胞本身也可發(fā)生胰島素抵抗，但具體機制尚不清楚。因，●此，本研究旨在觀察胰島素對胰島細胞的作用，結合基因和蛋白質表達。分析，討論其中可能的機制，并探索促進胰島細胞生存和恢復正常功能●，的途徑。本研究觀察了胰島素對大鼠原代胰島細胞(擁有完整的胰島結構)和小鼠MIN6胰島p細胞株(單一的細胞類型)的作用，進而

2、在培養(yǎng)環(huán)境中添加胰島素抗體，以中和胰島素的效應，并進一步采用熒光實時定量PCR●和Western蛋白印跡方法，從基因和蛋白表達層面分析了胰島素對胰島細胞的作用機制。結果發(fā)現，外源性胰島素(0．1nmol／L和100nmol／L)對大鼠原代胰島細胞和小鼠MIN6胰島p細胞株的葡萄糖刺激的胰島素分泌(GSIS)功能沒有明顯影響，與單純高濃度葡萄糖培養(yǎng)無差異(P>0．05)；添加胰島素抗體(0．125～2pg／m1)后，則表現胰島素分泌量降低(測定C’．：肽，P

3、劑量一效應、時間一效應關系，而加入相同濃度的無關抗●體后，胰島素的分泌量與對照組沒有差異(P>O．05)。形態(tài)學觀察也發(fā)現，經胰島素抗體干預的胰島細胞，較早出現胰島結構的破壞和胰島細胞的死亡，因體外培養(yǎng)的環(huán)境中并不存在體液免疫和細胞免疫的完整體系，也排除了抗體免疫球蛋白的非特異作用，推測其影響可能由胰島素抗體中和了環(huán)境中的胰島素所致。通過噻唑藍(MTT)的細胞活力分析也發(fā)現，小、●●?！袷驧IN6胰島p細胞株在胰島素抗體干預后，活力較快下降a：作為對照的相同濃度無關抗體對大鼠原代胰島或小鼠MIN6胰島p細胞株均無類似效應?；蚝偷鞍踪|表達研究顯示，胰島素或胰島素抗體對于胰島細胞

4、的-‘胰島素及其調控因子PDX一1的表達影響均不顯著，胰島素使Bcl-2的表一●●‘．達略有升高，而胰島素抗體貝lJI下調Bcl-2的表達，并上調Bad和Bax的。L表達。提示胰島素對胰島細胞的分泌功能影響不大，但能夠提高細胞的、●生存活力，而胰島素抗體可能通過中和胰島素的作用，促進胰島p細胞的凋亡。關鍵詞糖尿病，胰島：胰島素，胰島素抗體，基因表達，蛋白質表達上海交通大學醫(yī)學院2005級博士學位論文EFFECTSOFINSULINONISLET13．CELLSANDITSMECHANISMAbstractFromtherecentstudies，mostofthetype2di

5、abeticpatientshadearly·phaseinsulinsecretiondeficiencywhenthediagnosisestablished．Thedeficiencywascausedofimpiredislet13-cellfunction，whichcouldberecoverpartiallyortotally，withappropriatetreatment．Ifwasalso．．foundthatinsulincouldaffectisletcellsiIlanautocrineway,andonthecontrary,islet13-cell

6、scouldresistanttoinsulinliketheothertissues．But,therelationshipbetweentheinsulinandtheisletremainsunclear．刀jeaimofthisstudyistoexploretheinsulineffectsontheisletcellsandtheexpressionofrelatedgenes，inordertorevealtheirrelationshipandfindoutthewayimprovingtheislets’function．Inthepresentstudy,p

7、rimaryratisletcellsandmiceMIN6IB-cellswereculturedwithexogenicinsulin(O．1and100nmol／L)andinsulinantibodies(O．125-2lxg／m1)，whichmayneutralizetheinsulin．Real—timePCRandWesternblottingtechniqueswereappliedto●e．1ucidatetheinn．erlinks．Neitherprimaryrati