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時間:2019-02-02
《胰島素對胰島β細胞的影響及其機制研究》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、上海交通大學醫(yī)學院2.005級博士學位論文胰島素對胰島細胞的影響及其機制研究摘要:近年來的研究發(fā)現大多數2型糖尿病患者在發(fā)病初期已出現胰島素,的早期相分泌缺陷;反映其島p細胞功能已出現障礙,若及時治療則能夠部分或完全地恢復其胰島功能。另有研究者發(fā)現胰島素具有自分泌作用,且胰島p細胞本身也可發(fā)生胰島素抵抗,但具體機制尚不清楚。因,●此,本研究旨在觀察胰島素對胰島細胞的作用,結合基因和蛋白質表達。分析,討論其中可能的機制,并探索促進胰島細胞生存和恢復正常功能●,的途徑。本研究觀察了胰島素對大鼠原代胰島細胞(擁有完整的胰島結構)和小鼠MIN6胰島p細胞株(單一的細胞類型)的作用,進而
2、在培養(yǎng)環(huán)境中添加胰島素抗體,以中和胰島素的效應,并進一步采用熒光實時定量PCR●和Western蛋白印跡方法,從基因和蛋白表達層面分析了胰島素對胰島細胞的作用機制。結果發(fā)現,外源性胰島素(0.1nmol/L和100nmol/L)對大鼠原代胰島細胞和小鼠MIN6胰島p細胞株的葡萄糖刺激的胰島素分泌(GSIS)功能沒有明顯影響,與單純高濃度葡萄糖培養(yǎng)無差異(P>0.05);添加胰島素抗體(0.125~2pg/m1)后,則表現胰島素分泌量降低(測定C’.:肽,P3、劑量一效應、時間一效應關系,而加入相同濃度的無關抗●體后,胰島素的分泌量與對照組沒有差異(P>O.05)。形態(tài)學觀察也發(fā)現,經胰島素抗體干預的胰島細胞,較早出現胰島結構的破壞和胰島細胞的死亡,因體外培養(yǎng)的環(huán)境中并不存在體液免疫和細胞免疫的完整體系,也排除了抗體免疫球蛋白的非特異作用,推測其影響可能由胰島素抗體中和了環(huán)境中的胰島素所致。通過噻唑藍(MTT)的細胞活力分析也發(fā)現,小、●●?!袷驧IN6胰島p細胞株在胰島素抗體干預后,活力較快下降a:作為對照的相同濃度無關抗體對大鼠原代胰島或小鼠MIN6胰島p細胞株均無類似效應?;蚝偷鞍踪|表達研究顯示,胰島素或胰島素抗體對于胰島細胞4、的-‘胰島素及其調控因子PDX一1的表達影響均不顯著,胰島素使Bcl-2的表一●●‘.達略有升高,而胰島素抗體貝lJI下調Bcl-2的表達,并上調Bad和Bax的。L表達。提示胰島素對胰島細胞的分泌功能影響不大,但能夠提高細胞的、●生存活力,而胰島素抗體可能通過中和胰島素的作用,促進胰島p細胞的凋亡。關鍵詞糖尿病,胰島:胰島素,胰島素抗體,基因表達,蛋白質表達上海交通大學醫(yī)學院2005級博士學位論文EFFECTSOFINSULINONISLET13.CELLSANDITSMECHANISMAbstractFromtherecentstudies,mostofthetype2di5、abeticpatientshadearly·phaseinsulinsecretiondeficiencywhenthediagnosisestablished.Thedeficiencywascausedofimpiredislet13-cellfunction,whichcouldberecoverpartiallyortotally,withappropriatetreatment.Ifwasalso..foundthatinsulincouldaffectisletcellsiIlanautocrineway,andonthecontrary,islet13-cell6、scouldresistanttoinsulinliketheothertissues.But,therelationshipbetweentheinsulinandtheisletremainsunclear.刀jeaimofthisstudyistoexploretheinsulineffectsontheisletcellsandtheexpressionofrelatedgenes,inordertorevealtheirrelationshipandfindoutthewayimprovingtheislets’function.Inthepresentstudy,p7、rimaryratisletcellsandmiceMIN6IB-cellswereculturedwithexogenicinsulin(O.1and100nmol/L)andinsulinantibodies(O.125-2lxg/m1),whichmayneutralizetheinsulin.Real—timePCRandWesternblottingtechniqueswereappliedto●e.1ucidatetheinn.erlinks.Neitherprimaryrati
3、劑量一效應、時間一效應關系,而加入相同濃度的無關抗●體后,胰島素的分泌量與對照組沒有差異(P>O.05)。形態(tài)學觀察也發(fā)現,經胰島素抗體干預的胰島細胞,較早出現胰島結構的破壞和胰島細胞的死亡,因體外培養(yǎng)的環(huán)境中并不存在體液免疫和細胞免疫的完整體系,也排除了抗體免疫球蛋白的非特異作用,推測其影響可能由胰島素抗體中和了環(huán)境中的胰島素所致。通過噻唑藍(MTT)的細胞活力分析也發(fā)現,小、●●?!袷驧IN6胰島p細胞株在胰島素抗體干預后,活力較快下降a:作為對照的相同濃度無關抗體對大鼠原代胰島或小鼠MIN6胰島p細胞株均無類似效應?;蚝偷鞍踪|表達研究顯示,胰島素或胰島素抗體對于胰島細胞
4、的-‘胰島素及其調控因子PDX一1的表達影響均不顯著,胰島素使Bcl-2的表一●●‘.達略有升高,而胰島素抗體貝lJI下調Bcl-2的表達,并上調Bad和Bax的。L表達。提示胰島素對胰島細胞的分泌功能影響不大,但能夠提高細胞的、●生存活力,而胰島素抗體可能通過中和胰島素的作用,促進胰島p細胞的凋亡。關鍵詞糖尿病,胰島:胰島素,胰島素抗體,基因表達,蛋白質表達上海交通大學醫(yī)學院2005級博士學位論文EFFECTSOFINSULINONISLET13.CELLSANDITSMECHANISMAbstractFromtherecentstudies,mostofthetype2di
5、abeticpatientshadearly·phaseinsulinsecretiondeficiencywhenthediagnosisestablished.Thedeficiencywascausedofimpiredislet13-cellfunction,whichcouldberecoverpartiallyortotally,withappropriatetreatment.Ifwasalso..foundthatinsulincouldaffectisletcellsiIlanautocrineway,andonthecontrary,islet13-cell
6、scouldresistanttoinsulinliketheothertissues.But,therelationshipbetweentheinsulinandtheisletremainsunclear.刀jeaimofthisstudyistoexploretheinsulineffectsontheisletcellsandtheexpressionofrelatedgenes,inordertorevealtheirrelationshipandfindoutthewayimprovingtheislets’function.Inthepresentstudy,p
7、rimaryratisletcellsandmiceMIN6IB-cellswereculturedwithexogenicinsulin(O.1and100nmol/L)andinsulinantibodies(O.125-2lxg/m1),whichmayneutralizetheinsulin.Real—timePCRandWesternblottingtechniqueswereappliedto●e.1ucidatetheinn.erlinks.Neitherprimaryrati
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