資源描述：
《hspa12b對(duì)內(nèi)毒素刺激的小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用及其機(jī)制》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、HSPAl2B對(duì)內(nèi)毒素刺激的鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用及其機(jī)制入到細(xì)胞內(nèi)。2．RT-PCR和WesternBlot檢測(cè)到mPMVECs中HSPAl2B表達(dá)下調(diào)。結(jié)論成功構(gòu)建HSPAl2B表達(dá)下調(diào)的mPMVECs。關(guān)鍵詞HSPAl2B，mPMVEC，敲除，綠色熒光蛋白第三部分HSPAl2B表達(dá)下調(diào)后LPS對(duì)mPMVECs的遷移功能、炎癥反應(yīng)以及凋亡的影響目的探討HSPAl2B對(duì)LPS刺激的mPMVECs遷移功能、炎癥反應(yīng)和凋亡情況的影響。方法根據(jù)以下情況將mPMVECs分為四組：①空白組、@LPS刺激組、③LPS+HSPAl2BsiRNA組、@LPS+空白siRNA組
2、，分別置于370C5％C02潮濕孵箱內(nèi)培養(yǎng)，用LPS與細(xì)胞共培養(yǎng)24h，取出細(xì)胞后用RT-PCR檢測(cè)IL．6、IL．16、IL．10和TNF．僅mRNA表達(dá)情況，使用劃痕實(shí)驗(yàn)和transwell小室檢測(cè)細(xì)胞遷移情況，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果RT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明：mPMVECs經(jīng)LPS刺激24h后，與平行對(duì)照組(LPS+空白siI斟A組)相比，HSPAl2B表達(dá)下調(diào)組IL．6和TNF．a(chǎn)mRNA表達(dá)水平顯著上升，而IL．10則表達(dá)下降，且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。遷移實(shí)驗(yàn)表明：與平行對(duì)照組對(duì)比，HSPAl2B表達(dá)下調(diào)組的mPMVECs的遷移功能明
3、顯減弱；凋亡實(shí)驗(yàn)表明：與平行對(duì)照組相比，HSPAl2B表達(dá)下調(diào)組LPS刺激后mPMVECs凋亡明顯增多。結(jié)論LPS刺激的HSPAl2B表達(dá)下調(diào)的mPMVECs遷移功能減弱、炎癥反應(yīng)增強(qiáng)、g--軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文凋亡明顯。說(shuō)明HSPAl2B可能內(nèi)毒素刺激的鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的具有一定的保護(hù)作用。關(guān)鍵詞熱休克蛋白A12B，肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞，內(nèi)毒素第四部分HSPAl2B對(duì)LPS誘導(dǎo)的mPMVECs中MAPK信號(hào)通路中p38的作用目的研究HSPAl2B對(duì)LPS誘導(dǎo)的mPMVECs中MAPK信號(hào)通路中p38的作用，初步探討HSPAl2B保護(hù)鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的可能機(jī)制。方
4、法實(shí)驗(yàn)先分兩組：轉(zhuǎn)染空白siRNA組和轉(zhuǎn)染HSPAl2BsiRNA組，觀(guān)察LPS刺激24小時(shí)后，內(nèi)皮細(xì)胞磷酸化p38(p-p38)、總p38(totalp38)和13-actin蛋白表達(dá)水平；用Westernblot法檢測(cè)p38表達(dá)變化情況。再將實(shí)驗(yàn)分成4組(DLPS組、(g)LPS+siRNA組、③LPS+siRNA+p38MAPK抑制劑(SB203580)組和④LPS+siRNA+等劑量SB203580溶劑DMSO組，觀(guān)察mPMVECs遷移功能、凋亡和炎癥因子表達(dá)情況。最后LPS刺激mPMVECs24h后，用免疫熒光雙標(biāo)和免疫共沉淀方法觀(guān)察HSPAl2B和p3
5、8MAPK蛋白間的相互作用。結(jié)果Westernblot分析法檢測(cè)各組P．p38、totalp38和13-actin，發(fā)現(xiàn)HSPAl2B干擾組p-p38顯著增強(qiáng)，p-p38和totalp38灰度值之比明顯增大，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(尸<0．05)。SB203580可明顯逆轉(zhuǎn)HSPAl2B表達(dá)下調(diào)所致的mPMVECs遷移功能抑制、凋亡增加和炎癥因子分泌改變。免疫熒光雙標(biāo)和免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí)HSPAl2B與p38MAPK信號(hào)通路中p38蛋白相互作用。結(jié)論HSPAl2B表達(dá)下調(diào)的mPMVECs中p38磷酸化顯著增強(qiáng)，而LPS刺激的HSPAl2B表達(dá)下調(diào)的mPMVECs遷移功能減
6、弱、炎癥反應(yīng)增強(qiáng)、凋亡明顯，且SB203580可逆轉(zhuǎn)這些變化，免疫熒光雙標(biāo)和免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步說(shuō)明HSPAl2BHSPAl2B對(duì)內(nèi)毒素刺激的鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用及其機(jī)制可能通過(guò)降低p38磷酸化水平來(lái)抑制LPS對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，從而對(duì)LPS誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)揮保護(hù)作用。關(guān)鍵詞HSPAl2B，LPS損傷，磷酸化p38，p38MAPK信號(hào)通路第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文AbstractBackgroundandresearchstrategyLungisoneofthemostvulnerableorgansinsepsis．Acutelunginjury(～LI)al
7、waysOccursatearlystagesofsepsiswithhi：ghincidencewhichisveryhotinsepsisresearch．Lipopolysaccharide-inducedpulmonarymicrovascularendotheliacells(PMVECs)injurydirectlyleadstobarrierdysfunction．PMVECsisoneofthekeycellswhichaccompany、)~，inlthecauseanddevelopmentofendotoxin—inducedacutelun
8、ginju
