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《鹽負(fù)荷誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的時(shí)相特征及機(jī)制》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、中圖分類號(hào)：R329.2碩士學(xué)位論文鹽負(fù)荷誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的時(shí)相特征及機(jī)制院（系）、所臨床醫(yī)學(xué)院研究生姓名鄧鵬學(xué)科、專業(yè)內(nèi)科學(xué)導(dǎo)師姓名李家富教授二Ο一二年四月目錄1鹽負(fù)荷誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的時(shí)相特征及機(jī)制???????????????????????11.1中文摘要????????????????????11.2英文摘要????????????????????31.3前言??????????????????????61.4材料與方法???????????????????91.5結(jié)果???????????
2、???????????211.6討論??????????????????????311.7結(jié)論??????????????????????361.8參考文獻(xiàn)????????????????????371.9英漢縮略詞對(duì)照表????????????????412致謝??????????????????????423鹽和一氧化氮與高血壓的關(guān)系（綜述）???????43鹽負(fù)荷誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的時(shí)相特征及機(jī)制摘要目的：探討高鹽誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的時(shí)相特征及機(jī)制，以闡明鹽在高血壓等血管內(nèi)皮功能障礙性疾病中的意義。
3、方法：體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株，選第3—9代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。將人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞與加載鹽負(fù)荷的RPMI1640培養(yǎng)基（氯化鈉終濃度提高30mmol/L）共同孵育不同時(shí)間（6h、12h、24h、48h）作為測(cè)定組；將與測(cè)定組等體積的D-Hank’S液代替NaCl加入細(xì)胞培養(yǎng)液中，培養(yǎng)細(xì)胞48h，作為空白對(duì)照組；應(yīng)用等毫摩爾甘露醇代替氯化鈉培養(yǎng)細(xì)胞48h，并檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)以排除實(shí)驗(yàn)干擾因素。細(xì)胞爬片并進(jìn)行HE染色，于顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化；CCK-8試劑比色法檢測(cè)細(xì)胞的生長(zhǎng)活性；酶標(biāo)儀檢測(cè)乳酸脫氫酶漏出量；采用一氧化氮試劑
4、盒（硝酸還原酶法）比色法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中一氧化氮的含量；生化法檢測(cè)NOS活性；細(xì)胞爬片，免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)觀察eNOS和iNOS在蛋白水平的表達(dá)；采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)觀察eNOS和iNOS在基因水平的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(?x±s)表示，使用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果：鹽負(fù)荷能導(dǎo)致人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生形態(tài)學(xué)改變和凋亡，細(xì)胞的生長(zhǎng)活性受到抑制，細(xì)胞LDH漏出量增加，且呈時(shí)間效應(yīng)關(guān)系；鹽負(fù)荷呈時(shí)間依賴性地誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液中一氧化氮的含量增加，于24h達(dá)高峰；鹽負(fù)荷能抑制內(nèi)皮型一氧化氮合
5、酶的活性，及其在蛋白水平和基因水平的表達(dá)，且呈時(shí)間依賴性；鹽負(fù)荷呈時(shí)間依賴性地引發(fā)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶的活性增１強(qiáng)，及其在蛋白水平和基因水平的表達(dá)增加，于24h時(shí)達(dá)高峰。通過應(yīng)用等毫摩爾甘露醇代替氯化鈉培養(yǎng)細(xì)胞并對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，證明一氧化氮、LDH、eNOS和iNOS的改變不是由于加載鹽負(fù)荷后滲透壓改變而引起的。結(jié)論：1、鹽負(fù)荷能直接誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷。2、鹽負(fù)荷誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生損傷的機(jī)制可能是：eNOS的活性及表達(dá)受到抑制，生理性一氧化氮的合成減少，內(nèi)皮細(xì)胞出現(xiàn)損傷；同時(shí)，鹽負(fù)荷誘導(dǎo)iNOS的活性及
6、表達(dá)增強(qiáng)，產(chǎn)生大量病理性的一氧化氮，出現(xiàn)一氧化氮代謝紊亂，過氧化亞硝酸鹽的生成增多，并進(jìn)一步導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞損傷。3、鹽負(fù)荷通過上述途徑誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞損傷可能是鹽誘發(fā)高血壓的機(jī)制之一。關(guān)鍵詞：NaCl；人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞；NO；NOS；高血壓２Time-effectofDamageonHumanUmbilicalVeinEndothelicalCellLinesInducedbySaltloadanditsMechanismAbstractObjective:Thisstudywasconductedtoinvestigat
7、ethetime-effectofdamageandmechanismonhumanumbilicalveinendothelialcells(HUVECs)inducedbyhighsalt,inordertoelucidatetheroleofsaltinthedevelopmentofcardiovasculardiseasewhichitsendotheliumfunctionwasobstructedsuchashypertension.Methods：Vitroculturedhumanumbilical
8、veinendothelialcellline,choose3-9generationusedintheexperiment.HUVECswereculturedinRPMI1640containingsalt（NaClfinalconcentrationincreasedby30mmol/L）atdifferenttimes(6h,12h,2
