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《il-18rα抗體在小鼠急性移植物抗宿主病中的應(yīng)用研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文IL--18Rα抗體在小鼠急性移植物抗宿主病中的應(yīng)用研究姓名：張翠平申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：病原生物學(xué)指導(dǎo)教師：湯仁仙；鄭葵陽2012-04徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文IL一18Ra抗體在小鼠急性移植物抗宿主病中的應(yīng)用研究中文摘要目的探討應(yīng)用IL．18RO【抗體在小鼠急性移植物抗宿主病(aGVHD)中的作用，為臨床上尋找防治aGVHD的方法提供實驗依據(jù)。方法1．以8～10周齡雄性C57BL／6小鼠為供鼠，10～12周齡雄性BALB／c小鼠為受鼠，建立aGVHD模型。實驗分為三組：aGVHD模型組(BS組)、全身照射組(TBI組)和正常對照組(Normal組)。移植后觀察受鼠生存
2、率和生存狀態(tài)。流式細胞術(shù)檢測受鼠外周血中淋巴細胞嵌合率和輔助性T(Th)細胞亞群的比例變化；計數(shù)外周血白細胞數(shù)；觀察移植后小鼠aGVHD的臨床表現(xiàn)和病理改變，評價重要靶器官(肝、肺、小腸、皮膚)的損傷情況。2．應(yīng)用IL一18Rct抗體阻斷IL一18信號通路，觀察aGVHD的發(fā)生及主要靶器官損傷情況。實驗分為三組：IL．18Ra抗體干預(yù)的aGVHD組(干預(yù)組，BS+Ab組)、常規(guī)aGVHD對照組(模型組，BS組)、正常對照組(正常組，Normal組)。正常組不處理，干預(yù)組及BS組小鼠經(jīng)尾靜脈輸注骨髓細胞和脾細胞，以建立aGVHD模型。設(shè)移植當(dāng)天為0d，干預(yù)組受鼠于移植一ld～14d，每3天1次腹
3、腔注射anti．IL．18Ra抗體，10“g／只；同時間點BS組注射等體積的PBS。移植后每7d取外周血，用ELISA和CBA方法檢測IL．18及Th細胞亞群相關(guān)細胞因子IFN-Y、IL．4和IL．17A的水平；用FACS術(shù)檢測外周血Th細胞亞群比例。取靶器官肝、肺、小腸、皮膚等組織，用Real—timePCR、Westernblot和IHC等方法檢測IL．18、Fas及FasL的表達水平。利用TUNEL技術(shù)檢測上述靶器官中細胞的凋亡情況。結(jié)果1．a(chǎn)GVHD模型的建立與鑒定：BS組小鼠在照射后7～14d出現(xiàn)明顯aGVHD表現(xiàn)。照射后12d，受鼠體重下降至最低，為初始體重的(80．27+1．42
4、)％，臨床評分達到高峰，為5．80+0．15。外周血淋巴細胞嵌合率檢測證實移植后第5d受鼠血I}11供鼠來源的淋巴細胞為(43．51+1．14)％，到第20d時達到穩(wěn)定嵌合狀態(tài)3徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文(98．13+2．15)％。受鼠外周血白細胞計數(shù)顯示照射后7d達到清髓狀態(tài)，白細胞數(shù)低于1．0×109／L，供鼠來源細胞的植入使受鼠白細胞數(shù)量逐漸恢復(fù)，同時發(fā)生了aGVHD。外周血Th細胞亞群中以Thl細胞比例占優(yōu)勢，15d時達至tJ(44．284-1．97)％。aGVHD主要靶器官肝、肺、小腸和皮膚的組織病理染色均可觀察到組織的明顯損傷。正常組小鼠生存狀態(tài)好，TBI組小鼠于照射后14d內(nèi)全部死亡
5、，兩組小鼠均無aGVHD的表現(xiàn)。2．與BS組相比，干預(yù)組受鼠的aGVHD的全身表現(xiàn)和主要靶器官的變化：移植后15d，干預(yù)組受鼠評分為3．98士0．55，而BS組受鼠aGVHD臨床評分為6．15+0．82，兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0．05)。外周血Th細胞亞群檢測顯示移植后14d，干預(yù)組的Thl細胞亞群比例低于BS組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0．05)，同時檢測到干預(yù)組外周血中的IFN．v濃度高于BS組。移植后7d移植組小鼠血中的IL一18濃度明顯升高，干預(yù)組為(44．284-4．38)pg／ml，高于BS組(37．26+2．45)pg／ml，而正常組為(13．37+1．32)pg／ml。檢測
6、干預(yù)組和BS組的肝、肺、小腸和皮膚組織的IL．18、Fas和FasL的基因及蛋白表達水平及凋亡細胞數(shù)目，均顯示干預(yù)組的表達較BS組為低(P<0．05)，干預(yù)組的凋亡細胞數(shù)及臟器損傷程度亦低于BS組，兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(尸<0．05)。同時間點正常對照組小鼠的肝、肺、小腸和皮膚組織中這三種細胞因子的表達水平及外周血中的Thl細胞亞群、IFN．1，和IL．18濃度均較移植組為低，細胞凋亡和組織損傷不明顯。結(jié)論1．成功建立小鼠異基因骨髓移植aGVHD模型。2．用IL．18RGt抗體干預(yù)IL．18／IL．18R信號通路能減輕aGVHD的全身癥狀及靶器官損傷程度。3．其作用機制可能通過阻斷IL．18
7、介導(dǎo)的Fas／FasL途徑以及影響Th細胞亞群平衡而發(fā)揮。關(guān)鍵詞IL．18Rot；急性移植物抗宿主??；Fas；FasL；凋亡；Th細胞亞群徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文Tostudytheroleofanti—IL—18R僅inmurineacutegraft--versus--hostdiseaseAbstractObjectiveToexploretheroleofanti-IL-18Rainmuri
