大蒜素誘導(dǎo)卵巢癌耐順鉑細(xì)胞株skov-3ddp凋亡機(jī)制研究

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1、南昌大學(xué)碩士學(xué)位論文大蒜素誘導(dǎo)卵巢癌耐順鉑細(xì)胞株SKOV--3/DDP凋亡機(jī)制研究姓名：梁笑傾申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：譚布珍201205摘要目的：研究大蒜素作用于卵巢癌耐順鉑細(xì)胞株SKOV-3／DDP后P53、Bax、Bcl．2等凋亡相關(guān)基因表達(dá)變化，探索大蒜素誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的機(jī)制。方法：將SKoV-3／DDP細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組、大蒜素組、順鉑組和大蒜素+順鉑組；大蒜素組僅加入濃度為40ug／ml的大蒜素，順鉑組加入濃度為40ug／ml的順鉑，大蒜素+順鉑組加入大蒜素和順鉑各40ug／ml，各組分別培養(yǎng)24h、48

2、h。用MTT法測(cè)定各組細(xì)胞增殖抑制率，利用金氏公式計(jì)算兩藥的合用指數(shù)(q)分析兩藥聯(lián)合應(yīng)用的效果：q=E(AB)／[EA+(1一EA)×EB]，其中E(AB)為兩藥合用的抑制率，EA和EB為各藥單用時(shí)的抑制率，q=0．85～1．15表示兩藥作用相加；q>1．15表示兩藥作用協(xié)同：q<0．85表示兩藥作用拮抗【¨。RT-PCR方法觀察各組基因P53、Bax、Bcl．2mRNA的表達(dá)，Westernblot法觀察各組P53、Bax、Bcl．2蛋白表達(dá)變化。結(jié)果：1、大蒜素組、順鉑組、大蒜素+順鉑組對(duì)SKOV-3／DDP細(xì)胞生長(zhǎng)均有抑制作用

3、，與空白對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

4、別為1．16；48小時(shí)后合用指數(shù)分別為0．85；根據(jù)金氏公式可以推測(cè)，兩藥合用24小時(shí)后的作用效果表現(xiàn)為協(xié)同作用；兩藥合用48小時(shí)后的作用效果表現(xiàn)為相加作用。2、順鉑組促凋亡基因P53mRNA及蛋白的表達(dá)與空白對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義fP>O．05)，大蒜素組、大蒜素+順鉑組促凋亡基因P53mRNA及蛋白的表達(dá)高于順鉑組、空白對(duì)照組(P0．05)。摘要3、大蒜素組、順鉑組、大蒜素+順鉑組促凋亡基因BaxmRNA及蛋白表達(dá)較空白對(duì)照組明顯增加(P

5、<0．05)，大蒜素組BaxmRNA及蛋白表達(dá)高于順鉑組fP<0．05)，大蒜素+順鉑組對(duì)BaxmRNA及蛋白表達(dá)高于其各自單用時(shí)BaxmRNA及蛋白表達(dá)口<0．05)。4、順鉑組抑凋亡基因Bcl．2mRNA及蛋白的表達(dá)與空白對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0．05)，大蒜素組、大蒜素+順鉑組Bcl．2mRNA及蛋白表達(dá)量較順鉑組、空白對(duì)照組明顯降低(P<0．05)，大蒜素+順鉑組BaxmRNA及蛋白表達(dá)低于大蒜素組(P

6、抑制作用強(qiáng)于順鉑。大蒜素和順鉑間有協(xié)同／相加作用。2、大蒜素作用于SKOV-3／DDP細(xì)胞后，促凋亡基因P53、BaxmRNA及蛋白的表達(dá)增高，而抑凋亡基因Bcl．2mRNA及蛋白的表達(dá)降低，且優(yōu)于順鉑。大蒜素與順鉑聯(lián)合作用SKOV-3／DDP后促凋亡基因P53、BaxmRNA及蛋白的表達(dá)增高，和抑凋亡基因Bcl．2mRNA及蛋白的表達(dá)降低較各自單用組明顯。3、大蒜素組促凋亡基因P53mRNA和蛋白表達(dá)量增多，伴隨著促凋亡基因BaxmRNA和蛋白有顯著性增高。表明大蒜素誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡機(jī)制可能是先誘導(dǎo)P53mRNA和蛋白表達(dá)，通過(guò)P53基

7、因進(jìn)一步誘導(dǎo)BaxmRNA和蛋白表達(dá)，發(fā)揮連鎖凋亡激活效應(yīng)。4、大蒜素組Bax蛋白顯著性增高，同時(shí)伴Bcl．2蛋白表達(dá)量減低，表明大蒜素誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡機(jī)制可能是通過(guò)升高Bax蛋白，下調(diào)Bcl．2蛋白，從而促進(jìn)SKOV-3／DDP細(xì)胞凋亡?？傊?，大蒜素對(duì)SKOV-3／DDP細(xì)胞生長(zhǎng)有抑制作用，誘導(dǎo)SKOV-3／DDP細(xì)胞凋亡可能與促進(jìn)P53、Bax的表達(dá)增高、Bcl．2的表達(dá)降低有關(guān)。關(guān)鍵詞：大蒜素；順鉑：卵巢癌：基因表達(dá)；SKOV-3／DDP；凋亡IIIAbstractABSTRACTObjective：ToinvestigateP53

8、，BaxandBcl-2andotherapoptosis-relatedgeneexpressionchangesofovariancancercisplatin-resistantcelllinesSKOV-3／DD