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《鈍頂螺旋藻sp-ch32藻膽蛋白的高效表達特性及制備工藝研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、浙江大學碩士學位論文鈍頂螺旋藻Sp-CH32藻膽蛋白的高效表達特性及制備工藝研究姓名：劉艷輝申請學位級別：碩士專業(yè)：生物物理學指導教師：汪志平20050601摘要螺旋藻是絲狀的多細胞藍藻，是當前國內外研究與開發(fā)規(guī)模最大的經濟微藻。藻膽蛋白是螺旋藻中含有藻膽素、具有熒光特性的一類生理活性蛋白，具有很高的理論研究與開發(fā)利用價值。藻膽蛋白不僅可作為天然色素用于食品、化妝品和染料等行業(yè)，而且因其具有提高機體免疫力、抗腫瘤、抗輻射、抗衰老和防治貧血等功效而廣泛用于醫(yī)藥保健領域。同時，利用其特有的光化學活性制成的熒光分子探針和光敏劑，在臨床醫(yī)學診斷、免疫化學、生物
2、工程及腫瘤激光治療等領域也有很好的應用前景。為篩選到能應用于生產實際的高產藻藍蛋白的鈍頂螺旋藻優(yōu)良新品系，我們對Sp—S、Sp—T、Sp-YEl5：,Sp-CH32、Sp—HUF01、Sp—IDF和Sp—YC09這7株在分類學上有代表性、且在養(yǎng)殖生產中表現優(yōu)良的鈍頂螺旋藻品系的光合色素作了較系統(tǒng)的比較研究。結果發(fā)現，Sp—CH32的葉綠素和類胡蘿h素與其它螺旋藻株的相當，而藻膽蛋白含量高達細胞干重的29．994％，比上述其它6株中最高者sp—s的高20．9％，比上述7株螺旋藻藻膽蛋白含量的平均值高36．9％。進一步測得取自工廠化養(yǎng)殖中6個生產批次Sp—
3、CH32的藻膽蛋白含量在29．872---35．821％之間，平均含量為32．412％。從而表明，Sp-CH32在實驗室和大規(guī)模養(yǎng)殖中均具有穩(wěn)定、高效表達藻膽蛋白的優(yōu)良特性。針對Sp—CH32藻膽蛋白的含量高、細胞較其它藻株易于破碎等特點，我們在總結前人工作的基礎上，通過研究建立了Sp—CH32藻膽蛋白的制備工藝，并對純化出的藻藍蛋白和別藻藍蛋白的光譜特性等作了研究。藻體細胞經凍融破碎，所得粗提液經(NH。)：sO。沉淀所得45％～50％飽和度的級份，直接上SephacrylS-200凝膠過濾層析柱，不僅使藻膽蛋白的純度值提高到3左右，還去除TfNH4
4、Ls04，省去繁瑣、I耗時的透析脫鹽過程。進而在比較了QSepharoseFastFlow、DEAE52和羥基磷灰石(HA)三種離子交換層析柱純化效果的基礎上，確定HA對藻膽蛋白的純化效果最好，優(yōu)化后的制備工藝能同時純化出純度值均大于4．O的高純PC和APC，且兩者之和達細胞干重的15．767％，從粗提液到試劑級純品的藻膽蛋白得率高達52．57％。同時，我們還根據在儲運和使用中選擇產品劑型等實際需要，對高純Sp．CH32藻藍蛋白(Pc)和別藻藍蛋[h(AFC)在溶液狀態(tài)與凍干粉狀態(tài)下的穩(wěn)定性，作了較系統(tǒng)的比較研究。結果表明，PC和APC溶液在60。C或
5、70。C時處理10min即變性；在4℃、30。C或45。C時即使調整溶液的pH值也不穩(wěn)定：只有在．20。C呈冰凍狀態(tài)時，才能保持長期穩(wěn)定。而將PC和APC經冷凍干燥制成凍干粉后，它們穩(wěn)定性均得到了顯著提高，能滿足儲存、運輸和使用等實際需要。IIAbstractSpirulinaplatensisismulti-cellfilamen．tousblue—greenalga,simultaneously,itisalleconomicmicroalgawiththelargestscaleofresearchandexploitureinlandandab
6、road．Thephycobiliproteinsarekindsofactiveproteinwhichextensivelyexistsinspirulina，anditbearsphycobilinwithfluorescenceidiosyncrasy,SOthephycobiliproteinspossessesgreatvaluesintheoryresearchaswellasexploiture．Thephycobiliproteinscallnotonlybeusedasnaturalpigmentsinfood，cosmetican
7、ddyeindustries，butalsobeappliedtotheareaofmedicamentsandhealthyfoodssinceitcallimproveimrnanecapabilityandresistt=11lnour，radiation，caducity，anaemiaandSOon．Inaddition，asfluorescencemolecularprobeandphotosensitivereagent，ithasfineprospectinclinicaldiagnoses，immunochemistry,bioeng
8、ineeringandtumorlasertherapy．Inordertoscreenout
