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1、浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文直接測序方法研究浙江漢族人群MICA基因遺傳多態(tài)性姓名：趙輝申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)指導(dǎo)教師：嚴(yán)力行20080501浙江大學(xué)2008屆碩士學(xué)位論文bpbasepair縮略詞堿基對dNTPdeoxyribonucleotidetriphosphase三磷酸脫氧核糖核苷HLAhumanleukocyteantigen人類白細(xì)胞抗原LA—TaqlargeandaccurateTaqDNApolymeraseLA—TaqDNA聚合酶刪Cmajorhistocompati
2、bilitycomplex主要組織相容性復(fù)合物PCRp01ymerasechainreactionSBTsequence—basedtypingSNPsinglenucleotidepolymorphismSTRshorttandemrepetition聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)測序分型技術(shù)單核苷酸多態(tài)性短串聯(lián)重復(fù)序列MICAMHCIclasschain—relatedgeneA姍C(jī)I類鏈相關(guān)基因ASSPsequencespecificprimer序列特異性引物SSOsequencespecificoligonu
3、cleotideprobe序列特異性寡核苷酸探針GFgenefrequencyHFhaplotypefrequencySAPshrimpalkalinephosphataseEXOexonuc1ease基因頻率單倍型頻率蝦堿性磷酸酶核酸外切酶MICB刪CIclasschain—relatedgeneB刪CI類鏈相關(guān)基因BEBTBEHGHethidiumbromidetris—borate—EDTAhumangrowthhormone溴化乙錠Tris一硼酸一EDTA人類生長激素瀵汪大學(xué)2∞器磊疆士學(xué)鍍論
4、文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所里交盼學(xué)德論文是本人在導(dǎo)幫指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工捧及取得的磺究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得逝姿基堂或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書麗使蕉過麴謄耋辯。與我～同工作麓網(wǎng)志對本研究所徽的{王鷹貢獻(xiàn)均已在論文中作了臻確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：簽字日期：年月舀學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解邀鋈墨堂有關(guān)保留、使用學(xué)馕論文麴覯寇，有毅保留并向因家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查
5、闋和借閱。本人授權(quán)澎姿態(tài)鱟可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采饜影印、縮印或掃摧等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。(保密的學(xué)位論文在解密蔗適用本授權(quán)書)學(xué)位論文作者簽名：導(dǎo)師簽名：簽字日期：年月日簽字日期：年月日學(xué)位論文作者畢業(yè)焉去向；工作單位：通訊地址：67電話：郵編：浙江大學(xué)2008屆碩士學(xué)位論文測序方法研究浙江漢族人群腳謝基因遺傳多態(tài)性浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)碩士研究生導(dǎo)師趙輝嚴(yán)力行教授摘要研究背景朋翻(主要組織相容性復(fù)合體I類鏈相關(guān)基因A)屬于非經(jīng)典的HLAI類分子，基
6、因定位于人類第6號染色體。研究證實(shí)朋謝與HLAI類分子高度相似，但朋翻和經(jīng)典HLAI類分子存在不同。腳翻既不和B2微球蛋白結(jié)合，又不提呈抗原肽，但可與NKG2D受體結(jié)合調(diào)節(jié)NK細(xì)胞和T細(xì)胞功能。腳硎和經(jīng)典的HLAI類分子一樣，具有高度的遺傳多態(tài)性，目前已經(jīng)報(bào)道有64個(gè)等位基因。朋翻的多態(tài)性主要集中在它的2、3、4、5號外顯子，部分在1和6號外顯子。其中5號外顯子比較特殊，它含有不同數(shù)目的GCT三聯(lián)重復(fù)序列，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)至少有八種不同的三聯(lián)體數(shù)目，彳墨、彳夙彳民彳7’彳占，彳9’彳J∥以及彳丘J，A后面
7、的數(shù)字代表GCT三聯(lián)體的重復(fù)數(shù)目，彳五，代表在彳萬的第二個(gè)(GCT)后面多了一個(gè)G。研究報(bào)道朋硎和一些自身免疫性疾病、腫瘤疾病的發(fā)生存在一定的關(guān)聯(lián)，新近研究證明抗供體HLA和MICA抗體均為陰性的患者器官移植效果更佳，存活時(shí)間長，但是現(xiàn)在朧詡的功能還有許多方面不明確。我們擬建立準(zhǔn)確的刎詡檢測方法，并檢測浙江漢族人群的遺傳多態(tài)性分布，為進(jìn)一步深入研究刎詡功能作用提供基礎(chǔ)。目前國內(nèi)外檢測朋翻主要為對2、3、4號外顯子進(jìn)行直接測序并結(jié)合GeneScan技術(shù)檢測5號外顯子進(jìn)行分型，或單獨(dú)采用GeneScan方
8、法對朋翻五號外顯子多態(tài)性分布進(jìn)行研究，這類方法均存在不能有效區(qū)分部分刎例等位基因的問題。本研究我們設(shè)計(jì)方法對腳硎2—6號外顯子進(jìn)行直接測序，并采用GeneScan方法對5號外顯子進(jìn)行分型，建立了一種系統(tǒng)、全面、準(zhǔn)確的朋翻基因分型方法，并首次在人群中對5、6號外顯子進(jìn)行了序列分析。我們建立的朋硎分型方法完善了以前的分型技術(shù)，獲得了浙江漢族人群加翻的遺傳多態(tài)性資料，為進(jìn)一步研究MICA功能提供了科學(xué)基礎(chǔ)。2浙江大學(xué)2008屆碩士學(xué)位論文實(shí)驗(yàn)方法王、標(biāo)本來源：
