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《玉米外源抗蟲(chóng)基因轉(zhuǎn)化體創(chuàng)制與表達(dá)分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、學(xué)校代碼學(xué)號(hào)或申請(qǐng)?zhí)柮芗?jí)10459201222161887鄭*l夫孚專業(yè)碩士學(xué)位論文玉米外源抗蟲(chóng)基因轉(zhuǎn)化體創(chuàng)制與表達(dá)分析作者姓名：導(dǎo)師姓名：專業(yè)學(xué)位名稱：培養(yǎng)院系：完成時(shí)間：林鴻田保明教授鐵雙貴研究員植物保護(hù)生命科學(xué)學(xué)院2014年5月Athesis(diss酣ation)submittedtoZhengzhouUniVers毋forthedegreeofMaster(doctor)Transf．omingMaizeWithhlsect—resistantGeneandEXpressionAnalysisByHongLin-一Supervisor：P
2、rofBaomingTianShuangguiTiePanltProtectionSchoolofLifescienceMay2014原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的科研成果。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均己在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者：樸鷗嗽刎壚f月砷日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文
3、的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時(shí)，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作者：轍日期：)孵年f且珥日摘要玉米是世界上最重要的糧食作物之一，蟲(chóng)害是造成玉米產(chǎn)量損失的主要原因。傳統(tǒng)育種耗時(shí)長(zhǎng)、效率低，轉(zhuǎn)抗蟲(chóng)基因玉米成為解決蟲(chóng)害的最有效途徑之一。本研究根據(jù)植物偏愛(ài)密碼子原則，對(duì)
4、野生型蘇云金芽孢桿菌CrylF進(jìn)行人工改造，并在57端前面加上了AdllI的增強(qiáng)子序列。為了初步驗(yàn)證其對(duì)玉米螟等害蟲(chóng)的毒性，我們將人工改造后的基因構(gòu)建到原核表達(dá)載體中PET28b中，繼而將載體轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL2l(DE3)菌株中，進(jìn)行原核誘導(dǎo)表達(dá)。SDS．PAGE電泳顯示原核表達(dá)誘導(dǎo)出來(lái)的殺蟲(chóng)蛋白主要以包涵體的形式存在。免疫試紙條顯示C巧lF可溶蛋白的存在。收集原核表達(dá)誘導(dǎo)的可溶性蛋白，加入到人工制成的玉米螟飼料中，喂食玉米螟，進(jìn)行原核表達(dá)蟲(chóng)試實(shí)驗(yàn)。蟲(chóng)試實(shí)驗(yàn)證明，改造后的CrylF顯示出很強(qiáng)的殺蟲(chóng)能力，說(shuō)明Cr)rlF基因人工改造正確。改造正確后的
5、CrylF進(jìn)一步構(gòu)建到植物表達(dá)載體CPB中，該載體以組成型啟動(dòng)子CaMV35S驅(qū)動(dòng)目的基因，抗除草劑Bar基因作為選擇標(biāo)記基因。采用基因槍介導(dǎo)法遺傳轉(zhuǎn)化玉米愈傷組織，經(jīng)過(guò)組織培養(yǎng)得到轉(zhuǎn)基因植株。然后對(duì)得到的轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行分子鑒定。PCR初步篩選出陽(yáng)性植株，隨機(jī)選取4株P(guān)CR呈陽(yáng)性的植株進(jìn)行Southem分子雜交，證明外源基因整合到玉米基因組中。用CrylF免疫試紙條對(duì)PCR呈陽(yáng)性的植株進(jìn)行檢測(cè)，試紙條呈陽(yáng)性，說(shuō)明轉(zhuǎn)基因玉米植株能夠表達(dá)出相應(yīng)的殺蟲(chóng)蛋白。對(duì)表達(dá)CrylF殺蟲(chóng)蛋白的植株進(jìn)行室內(nèi)抗蟲(chóng)實(shí)驗(yàn)，證明轉(zhuǎn)基因植株表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗蟲(chóng)性。本實(shí)驗(yàn)將人工改造
6、后的CrylF基因，通過(guò)基因槍介導(dǎo)法得到轉(zhuǎn)基因植株。通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)基因植株的分子鑒定和室內(nèi)抗蟲(chóng)實(shí)驗(yàn)，證明獲得了CrylF蛋白高效表達(dá)的轉(zhuǎn)化體，為玉米育種提供抗蟲(chóng)材料。關(guān)鍵詞：玉米；抗蟲(chóng)；C巧lF；遺傳轉(zhuǎn)化；基因槍AbStraCtComisoneofmostimpon趾t南odcropsi11theworld，Pestd鋤ageisthemaillcausevieldlossesofmaize．Traditionalbreedingist油e-consumingandIowe伍ciency，transgenicIm泣ehasbccomeoneofthemo
7、ste位ctiVewaystosolVepestda撇ge．T11ewildBacillusthuringiellsisCr)r1Fgenewasmodifiedaccord啦tophntpre缸虹培codons，andthe5。endprecededbyaAdhIenhancersequencesthQrdertoveri句itsto妣itytothecomborerandtheotherpests，modi丘edCrylFgenewasclonedintoprok哪oticexpressionvectorPet28b，andthentheVec
8、tortransfomledintoE．coliBL2l(DE3)straill．TheproteineXpression
