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《蛋白酶高產海洋酵母的篩選、發(fā)酵條件優(yōu)化及酶性質的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、⑧研究生學位論文蛋白酶高產海洋酵母的篩選、發(fā)酵條件優(yōu)化及酶性質的研究研究生姓名王蒸指導教師姓名池蘧鰓救援申請學位撮攢蕊±專業(yè)名稱盎生生紐堂論文答辯日搬鯉生蔓昱鰉丑學位授予日期巡簍且中國海洋大學蛋白酶高產海洋酵母的篩選、發(fā)酵條件優(yōu)化及酶性質研究摘要本研究從自然界中分離篩選出一株高產蛋白酶的海洋酵母HN311，經鑒定屬于類酵母屬短梗霉(Aureobasidiumpullulans)。對HN311發(fā)酵產酶條件進行研究確定其最適產酶培養(yǎng)基組分為(％，wlv)：可溶性淀粉2．5，NaN032．0，起始pH6．0；最適產酶培養(yǎng)條件是：25
2、0mL錐形瓶培養(yǎng)基裝量為50mL，10．0％(v／v)的接種量，24℃條件下攪拌轉速為150rpm，通氣量為8，培養(yǎng)24h。在最適產酶條件下，培養(yǎng)24h時菌株HN31l發(fā)酵液中蛋白酶比活力可達到623．1U／mL。該蛋白酶是一種胞外酶，SephadexG一100凝膠過濾、CM—SepharoseFastFlow陽離子交換層析對菌株HN311發(fā)酵液中的蛋白酶進行了分離提純，獲得了SDS—PAGE呈單條帶的蛋白酶，分子量為33kD，Km和Vmax分別為0654mg／mL、25．64Pmol／min／mL。對該純酶進行部分酶學性質的
3、研究表明該蛋白酶的最適作用溫度和最適反應pH分別為45℃和10，酶比活力酶在pH偏中性環(huán)境中相對穩(wěn)定，當pH低于6或者pH高于10時，酶的比活力基本等于零。溫度對蛋白酶比活力的影響較為明顯，并且隨著時間的延長，溫度對蛋白酶的影響更為明顯，50。C以上保溫30min后酶比活力基本完全喪失。金屬離子Mn”對酶比活力有明顯地促進作用，O．OlmmoL／L的Mn”能夠使蛋白酶比活力提高至對照組酶比活力的近兩倍，10mmol／l的Mn2+可以使蛋白酶的比活力提高到原來的114倍。Mg”、ca2+、和Na+對蛋白酶比活力的影響都不太明顯，
4、O．01mmol／1的Fe”、Fe”、Zn2+和Cu2+對蛋白酶比活力的影響不大，但是10mmol／I的Fe3+、Fe”、zn2+4和Cu2+對酶比活力具有明顯的抑制作用，尤其是Hg”在濃度為n01mmoL／L或者是10mmol／l時即可使酶基本完全失活。PMSF、SDS對蛋白酶比活力具有明顯的抑制作用，可使酶基本完全失活，由此可以看出，此蛋白酶是絲氨酸型蛋白酶。關鍵詞：海洋酵母堿性蛋白酶發(fā)酵最適培養(yǎng)條件純化AbstractAstrainHN3l1withhighproteaseactivitywasisolatedfroms
5、edimentsofsalternnearQingdao，China．ItWaSidentifiedbelongtotheAureobasidiumpullulans．TheoptimalcompositionsofthemediumforHN311strainwerestudiedasfollows(％，w／v)：solublestarch2．5，NaN031．0，theinitialpH6．0．TheoptimalproducingproteaseconditionsforHN311wereillustratedbelow
6、：amountofinoculationl0％(v／v)，incubatingtemperature24。C，shakingcultivation150rpmandaeration8L／min．Theproteaseactivityoffermentedbrothcouldreach623．1U／mLwhenHN31wasincubatedundertheoptimalcultivitionconditions．Theproteaseofthestrainwaspurifiedbygelfiltration(SephadexG
7、一100colum)andion—exchangechromatography(CM—SepharoseFastFlowcolum)，SDS—PAGEshowedasinglebandforthepurifiedproteaseandthemolecularweightwasestimatedtobe33kD，Km=0654mg／mLandVmax=2564¨nol／min／mL。TheoptimaltemperatureandpHforhydrolysisoftheproteasewere45。Cand10，respecti
8、vely．ThechangesofpHandtemperaturehadthesignificantinfluencesontheproteaseactivity．Mn2+ionenhancedtheenzymeactivitysignificantly．10mmol／lor
