家蠶高效富集1-脫氧野尻霉素機理初步研究

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1、分類號S豎!：2UDC三壘三@密級坌五編號!Q2里窆S!Q15Q32汪蒜大擎碩士學位論文家蠶高效富集1．脫氧野尻霉素機理初步研究StudyontheEffectandPrimaryMechanismsofenrichmentabilityof1-DeoxynojirimycinfromMulberryLeavesbyBombyxmori導師眍臣旦臻作者姓名塞9且莖申請學位級別亟±學科(專業(yè))史藥堂論文提交日期2013?53論文答辯日期2Q131魚18學位授予單位和日期江菱太堂2Q13：魚答辯委員會主席評閱人獨

2、創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的內(nèi)容以外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果，也不包含為獲得江蘇大學或其他教育機構的學位或證書而使用過的材料。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律結果由本人承擔。2學位論文作者簽名．刊閂彥J口J與年6月f盧日學位論文版權使用授權書江蘇大學、中國科學技術信息研究所、國家圖書館、中國學術期刊(光盤版)電子雜志社有權保留本人所送交學

3、位論文的復印件和電子文檔，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存論文。本人電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致，允許論文被查閱和借閱，同時授權中國科學技術信息研究所將本論文編入《中國學位論文全文數(shù)據(jù)庫》并向社會提供查詢，授權中國學術期刊(光盤版)電子雜志社將本論文編入《中國優(yōu)秀博碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫》并向社會提供查詢。論文的公布(包括刊登)授權江蘇大學研究生處辦理。本學位論文屬于不保密町／。學位論文作者簽名．劉d磣少l與年6月【夠日指導撕簽名卜擬彪：．汕杉年5月f仁日江蘇大學碩士學位論文摘要桑葉中1．脫氧野尻

4、霉素(1．deoxynojirimycin，DNJ)是一種高效的糖苷酶抑制劑，能有效抑制二糖的分解，使單糖在腸道吸收降低，從而抑制血糖升高。家蠶一生食桑，且對DNJ具有奇妙的富集作用，但是關于家蠶富集DNJ的機理和過程目前國內(nèi)外尚未明確揭示。本論文研究了家蠶蠶體DNJ富集與食桑量的相關性及家蠶體內(nèi)DNJ含量與二糖酶的關系，并采用蛋白質(zhì)雙向電泳、差減雜交技術、RT-PCR等分子生物學方法和技術手段初步研究家蠶體富集DNJ的分子機制。主要研究內(nèi)容和結論如下：(1)家蠶1．脫氧野尻霉素體內(nèi)富集分布規(guī)律及與食桑量的相

5、關性研究。采用了柱前衍生化高效液相色譜法分析不同生長階段家蠶及其代謝產(chǎn)物和所食桑葉中DNJ的含量，研究家蠶體1．脫氧野尻霉素富集與食桑量的相關性，結果顯示不同組織器官中蠶血DNJ含量最高，達0．4％，其次為蠶消化管，絲腺中未檢測到。不同生長期家蠶及其副產(chǎn)物中DNJ的累積量有較大差異，且呈一定規(guī)律性變化，先上升后下降，于四齡時最高。家蠶幼蟲期蠶體及其副產(chǎn)物中DNJ總累積量與其在該階段所食桑葉中DNJ總量相當；且家蠶的任一成長發(fā)育階段(蟻蠶和熟蠶不吃桑葉除外)，其蠶體DNJ含量均大大高于桑葉中的DNJ含量，表明家

6、蠶具有累積或富集DNJ的機能，本研究結果為進一步研究家蠶富集DNJ的機制提供了理論依據(jù)。(2)初步研究了家蠶體內(nèi)ONJ含量與二糖酶的關系。采用芴甲氧酰氯(FMOC．C1)柱前熒光衍生．高效液相色譜法測定了25個品種家蠶五齡第三天蠶體DNJ含量，并采用還原糖法測定不同家蠶體內(nèi)的糖苷酶活力。結果表明，不同品種家蠶體DNJ含量差異較大，最高的品種與最低的品種含量相差6．91倍；家蠶體DNJ含量與蠶體內(nèi)的蔗糖酶、乳糖酶等二糖酶活力呈負相關，與淀粉酶的活力相關性較小。(3)初步鑒定了家蠶富集DNJ的糖苷酶抑制性的相關特

7、異蛋白。采用蛋白雙向電泳及質(zhì)譜分析技術對家蠶富集DNJ的相關酶物質(zhì)進行探索性研究，鑒定出囊泡的ATP合酶催化亞組A，熱休克同源蛋白，actinA3，谷胱甘肽硫轉移酶，質(zhì)子轉移ATP合酶13亞基，絲氨酸蛋白酶前體，血淋巴蛋白，果糖1,6．二磷酸鹽(酯)縮醛酶，硫醇蛋白等在內(nèi)的9個特異蛋白，且推測與DNJ富集相關。家蠶高效富集卜脫氧野尻霉素機理初步研究(4)家蠶富集DNJ的二糖酶抑制性相關基因SSH文庫的構建。建立了家蠶體DNJ含量差異較大的組織間抑制性消減雜交cDNA文庫，從建立的cDNA文庫隨機挑選出40個陽

8、性克隆進行測序，通過BLAST比對，得出細菌核糖體RNA、堿性絲氨酸蛋白酶、核糖體蛋白、16s核糖體RNA、類胰蛋白酶、表皮甘氨酸蛋白、過氧化氫酶和堿性核酸酶等8種蛋白，對消減文庫中的差異表達基因進行半定量RT-PCR分析，研究推測堿性絲氨酸蛋白酶和過氧化氫酶可能與DNJ富集相關。關鍵字：1．脫氧野尻霉素，富集，食桑量，差減雜交，雙向電泳II江蘇大學碩士學位論文StudyontheEffectand