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《北京油雞cdna文庫構(gòu)建及il-18基因的克隆與表達(dá)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文北京油雞cDNA文庫構(gòu)建及IL-18基因的克隆與表達(dá)研究姓名：佟春玲申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：臨床獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：巴音吉日嘎拉;關(guān)偉軍20090501摘要構(gòu)建北京油雞cDNA文庫對(duì)于北京油雞遺傳資源的保護(hù)以及其基因功能的研究具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)取北京油雞肝臟組織，提取總RNA，運(yùn)用SMART刊技術(shù)構(gòu)建了北京油雞肝臟組織cDNA文庫，所構(gòu)建的eDNA文庫未擴(kuò)增文庫滴度為2．01x106pfu／mL，擴(kuò)增文庫滴度為1．17×10mpfu／mL，重組率為93．8％，平均插入片段大小約為1．0kb。本研究的實(shí)施不僅對(duì)于雞基
2、因結(jié)構(gòu)與功能研究具有重要意義，而且對(duì)于北京油雞基因資源的保存具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)通過組織塊貼壁培養(yǎng)法，成功構(gòu)建了多浪羊的成纖維細(xì)胞系，并對(duì)其進(jìn)行了多項(xiàng)生物學(xué)特性檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果表明，細(xì)胞系的各項(xiàng)指標(biāo)均達(dá)到美國典型培養(yǎng)物中心刀TCC(AmericantypeCultureCollection)細(xì)胞系鑒定標(biāo)準(zhǔn)，為研究外源基因在成纖維細(xì)胞中的表達(dá)與調(diào)控提供了優(yōu)質(zhì)的靶細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)采用BamHI與XhoT雙酶切法建立北京油雞pGEX-4T-1-IL一18原核表達(dá)載體，并在BL21菌中成功表達(dá)。采用Sa]I與BamHI雙酶切法建立北京油雞pEGFP—N
3、3一IL—18真核表達(dá)載體，并在浪羊成紅維細(xì)胞中成功表達(dá)。關(guān)鍵詞：北京涫雞；cDNA文庫：IL-18：基因克隆；表達(dá)ConstructionofeDNAlibraryandIL·-18genecloningandexpressionofBeijingFattyChicken^bstractTheeDNAlibraryofBeijingFattyChickenhasgreatsignificancehotonlyforitsprotectionofgeneticresouiv．燃butalsoforthereaseachofgenefunc
4、tion．Inthisstudy，thetotalRNAwereextractedfromtheliver矗愛；u陀ofBeijingFattyChicken,andthelivertissureeDNAlibraryofBeijingFattyChickenhadbeenconstructedbyusingSMARTTMtechnique．neresultsshowthatthetiterofunamplifiedcDNAlibraryis2．01x106pfu·mL一，thetiterofamplifiedlibraryis1．17x
5、1010pfu·mL"l，therateofrecombinantisabove93．8％，theaveragesizeofthefragmentsis1．0kb．ThisstudyisnotonlyimportantforthestructureandfunctionresearchonChickengenes,butalsoimportantfortheprotectionofgenetici'esourcesforBeijingFattyChicken．Thisstudysuccessfullyestablishedthetarge
6、tcelllineofDuolangSheepthroughdirectadherentculturemetheodsandalsosuccessfullyconductedthevariouskindsofexperimentsonthebiologicalcharacteristicsofdetection-TheresultsshowthatthequalityofthecelllinemetthequalityrequirementsoftheATCC(American13哩,eCultureCollection)，indicat
7、ethatthecellswe陀welltargetcellsforgene懿pression．Inthisstudy，wealsoconstructedBeijingFattyChicken'sProkaryoticexpressionvectorpGEX4T—l·IL-18byadoringBamHIandXhoImethodofdoubleIes缸'ictionenzymeandwhicharealsoexpressedinBL21bacteria,wealso咖sl田哪刪BeijingFattyChicken'seukaryoti
8、eexpressionvectorpEGFP-N3一IL-18byadoptingSalIandBamHImethodofdoublerestrictionenzymeandexpressio
