海生紅藻多管藻中四種r-藻紅蛋白分離、純化及多肽組成的分析論文

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1、煙臺大學(xué)碩士學(xué)位論文海生紅藻多管藻中四種R-藻紅蛋白的分離、純化及多肽組成分析姓名：華萌萌申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：海洋生物學(xué)指導(dǎo)教師：孫力2011-03-25摘要：本研究用50mmol/L的磷酸緩沖液（pH=7.0）浸泡一種海生紅藻多管藻（PolysiphoniaurceolataGrev），經(jīng)過超聲波破碎和硫酸銨沉淀，得到藻膽蛋白粗提液。經(jīng)過DEAE-52離子交換層析分離藻膽蛋白粗提液，得到有電荷差異的四種藻紅蛋白（phycoerythrin,PE）和一種藻藍(lán)蛋白（phycocyanin,PC

2、），其中藻紅蛋白為主要研究對象。然后經(jīng)過SephadexG-150和SephacrylS-300凝膠過濾層析對這四種藻紅蛋白進(jìn)行純化，分別為PE169-1、PE267-1、PE356-2和PE523-2。這四者具有非常相似的吸收光譜和熒光光譜，分別在498nm、540nm和565nm左右處都有特征吸收峰，在576nm處有一個熒光發(fā)射峰；四種藻紅蛋白中除PE169-1外，其它三種藻紅蛋白PE267-1、PE356-2和PE523-2在非變性的PAGE和非變性的IEF中均表現(xiàn)為單一條帶，且等電點分別

3、為4.5、4.4和4.4。PE169-1含量較少，非變性的PAGE和IEF、變性的IEF和SDS-PAGE分析表明其可能為藻紅蛋白六聚體解離的小分子PE。PE267-1、PE356-2和PE523-2的SDS-PAGE、變性等電聚焦和二維電泳結(jié)果表明：三者均由三種相同的含發(fā)色團的有色亞基組成，其分子質(zhì)量分別為18.4kDa(α)、20.7kDa(β)和34.5kDa(γ)，其比例為3α:3β:1γ，且PE356-2和PE523-2還含有45.7kDa的45.762.1無發(fā)色團多肽(Lnk)，PE

4、523-2含有62.1kDa的無發(fā)色團多肽(Lnk)，其比例分別45.762.1為6α:6β:2γ:1Lnk，6α:6β:2γ:0.5Lnk，可能的存在形式為(αβ)3-γ-(αβ)3-γ、45.762.145.762.1γ-(αβ)3-γ-(αβ)3-Lnk和γ-(αβ)3-γ-(αβ)3-Lnk。和γ亞基一樣，Lnk和Lnk可能作為連接多肽在“桿”結(jié)構(gòu)域連接六聚體R-PE。二維電泳分析表明，α亞基有等電點不同的三種形式，其等電點分別為5.95、5.80和5.65；β亞基五種不同形式，等電點分

5、別為5.56、5.46、5.33、5.25和5.11。這些結(jié)果為R-PE六聚體及其構(gòu)建大型紅藻藻膽體“桿”結(jié)構(gòu)域研究提供了有價值的實驗資料。本實驗建立的層析、PGAE、IFE和二維電泳的方法可應(yīng)用于其它大型紅藻的藻膽蛋白組成研究。關(guān)鍵詞：紅藻；多管藻；藻膽蛋白；R-藻紅蛋白；層析；凝膠電泳；二維電泳AbstractPhycobiliproteinsfromamarineredmacroalgaPolysiphoniaurceolataGrevwereextractedin50mmol/Lphos

6、phatebuffer(pH=7.0)whenthealgawasdisruptedbyultrasonication,andthentheywereprecipitatedbysalting-outwithammoniumsulfate.FourR-phycoerythrins(R-PEs)andanR-phycocyanin(R-PC)withdifferentelectricchargeswereisolatedfromthephycobiliproteinextractbytheione

7、xchangechromatographyonDEAE-52,andthefourisolatedR-phycoerythrins,namedPE169-1，PE267-1,PE356-2andPE523-2,weretheobjectsofthisstudy.ThenthefourR-phycoerythrinswerepurifiedbythegelfiltrationchromatographyonSephadexG-150andSephacrylS-300.Thefourprepared

8、R-PEshaveverysimilarspectralproperties:theyshowedthreeabsorptionpeaksatabout498nm,540nmand565nm,andgaveafluorescentemissionpeakatabout576nm.PE267-1,PE356-2andPE523-2,whichweredifferentfromPE169-1,showedasinglebandbothinnative-PAGEandinnativeisoelectr