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《海生紅藻多管藻R-藻藍(lán)蛋白分離純化及結(jié)構(gòu)特性分析》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、分類號：P735學(xué)號：201500370015碩士學(xué)位論文海生紅藻多管藻R-藻藍(lán)蛋白分離純化及結(jié)構(gòu)特性分析Theisolation,purificationandcharacteristicanalysisofR-phycocyaninfromPolysiphoniaurceolataGrev研究生姓名：王勝楠指導(dǎo)教師：孫力教授學(xué)科門類：理學(xué)專業(yè)名稱：生物學(xué)論文提交日期：2018年4月1日I摘要本實(shí)驗(yàn)選用從煙臺海濱采集的新鮮海生大型紅藻多管藻(Polysiphoniaurceolata-1Grev)為研究材料，用50mmo1·L的磷酸緩沖液(PBS
2、)浸取藻膽蛋白，提取液經(jīng)過濾離心后用500kDa的膜包超濾，超濾后的透過液用50kDa的膜包進(jìn)行截留濃縮。藻膽蛋白濃縮液依次經(jīng)SephacrylS-300和SephacrylS-200凝膠過濾，得到在618nm和650nm有特征吸收峰的R-PC/AP組分。R-PC/AP組分先經(jīng)過QSepharoseFastFlow-1-1離子交換層析，NaCl濃度梯度(50~250mmo1·L，150~350mmo1·L)洗脫，并在洗脫過程中加入7.5~6.5的pH梯度，分別收集R-PC和AP組分。再選用PhenylSepharose6FastFlow疏水層析分別
3、純化離子交換得到的R-PC和AP組分，PBS濃度梯度-1(400~10mmo1·L)洗脫收集R-PC、AP、R-PC2。建立了同時(shí)制備多管藻兩種藻藍(lán)蛋白和別藻藍(lán)蛋白的多維層析方法。收集到的R-PC組分在非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳中顯示單一條帶，R-PC2組分含少量藻紅蛋白。經(jīng)非變性等電聚焦測定，R-PC的等電點(diǎn)為5.63，R-PC2的等電點(diǎn)為5.62；R-PC和R-PC2在變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分析觀察到均有含一種α亞基和兩種β亞基，分子質(zhì)量分別為18.3kDa、20.5kDa和21.4kDa，但是β亞基的相對含量不同，不含無色多肽，變性等點(diǎn)聚焦測得
4、R-PC的兩個(gè)β亞基的等電點(diǎn)分別為5.8和5.74；R-PC2兩個(gè)β亞基的等電點(diǎn)分別為5.8和5.75。經(jīng)二維電泳確定R-PCβ8.58.5.574.574有四個(gè)β亞基分別為、β、β、β。214.205.214.205.關(guān)鍵詞：多管藻；R-藻藍(lán)蛋白；離子交換；疏水層析；凝膠電泳IIAbstractPhycobiliproteinwasextractedfromthefreshPolysiphoniaurceolataGrevin50-1mmo1·Lphosphatebuffer,pH7.0.Afterthephycobiliproteinswere
5、ultrafiltratedwith500kDaand50kDamembranecapsules,respectively.TheconcentratedphycobiliproteinconcentratewasisolatedbygelfiltrationusingSephacrylS-300andSephacrylS-200togiveR-PC/APfractionswithcharacteristicabsorptionpeaksat618nmand650nm.R-PC/APfractionswereisolatedbyQSepharose
6、FastFlowionexchangechromatographywithNaClsaltconcentrationgradientelution.ThepHgradientof7.5~6.5isaddedtotheelutionprocess.TheR-PCandAPfractionswerecollectedrespectively.Afterthat,theR-PCandAPfractionsobtainedbyionexchangechromatographywerepurifiedbyPhenylSepharose6FastFlowhyd
7、rophobicchromatography.ThecolumnwaselutedwiththeconcentrationgradientofPBSsaltconcentrationandtheR-PC,R-PC2andAPfractionswerecollected.TheR-PCfractionobtainedbythechromatographydisplaysinglebandinnativepolyacrylamidegelelectrophoresis.Theresultsofnativepolyacrylamidegelelectro
8、phoresisshowedthattheR-PC2fractioncontainedasmallamountofR-PE
