資源描述：
《抗鵝細(xì)小病毒vp1蛋白單克隆抗體制備及其識(shí)別抗原表位初步鑒定》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、東北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文抗鵝細(xì)小病毒VP1蛋白單克隆抗體的制備及其識(shí)別抗原表位的初步鑒定姓名：李俚申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：王君偉20080620摘要摘要鵝細(xì)小病毒(Gooseparvovirus，GPV)屬于細(xì)小病毒科(parvovirinae)依賴病毒屬(Dependovirus)，是鵝綱小病毒瘸(Gooseparvovirus)酶病原體。鵝細(xì)小病毒病又稱小鵝瘟(GoslingplagueGP)，其主要侵害30日齡以內(nèi)的各種雛鵝和雛番鴨，是一種急性、高度接觸性、敗血性傳染病。該瘸具有傳染性強(qiáng)、瘸
2、死率高的特點(diǎn)，以目前仍是危害養(yǎng)鵝業(yè)發(fā)展的最主的要傳染病之一。由予本病長(zhǎng)期困擾著養(yǎng)鵝監(jiān)，因此建立一種準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便的診鞭方法懿對(duì)該瘸作出早期的診斷已成為迫切的需要。細(xì)小病毒具有基因組短小，衣殼結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的特點(diǎn)，所以它{
3、’】的無關(guān)抗原成分更易于篩除，并利于將其制造成亞單位疫苗和重組診斷抗原。鵝細(xì)小病毒VPI蛋白(GPuVPl)是鵝細(xì)小病毒的主要結(jié)構(gòu)蛋白，它在病毒感染細(xì)胞的過程中起著重要的作用，通過單克隆抗體技術(shù)對(duì)GPV．VPl的抗原表位進(jìn)行研究，不僅有助于了解其抗原結(jié)構(gòu)與功麓的關(guān)系，琵顯對(duì)該瘸的診斷以及設(shè)計(jì)安全有效的基因工程
4、襲位疫苗等具有重要的意義。本研究首先構(gòu)建了帶有表達(dá)載體pET30a(+)的重組GPV-VPl，在大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng)中避行了表達(dá)，裁用GPV感染鵝的盤清對(duì)表達(dá)產(chǎn)豹進(jìn)行Westernblot分櫥，證實(shí)表達(dá)的融合蛋囪具有較好的反應(yīng)活性。然后以純化后的GPV-VPl融合蛋白為免疫抗原，免疫BALB，c小鼠，并以其作為為篩選抗原，建愨檢測(cè)抗GPV-VPl蛋白單克隆抗體的ELISA方法。按常規(guī)方法進(jìn)行敲合，間接ELISA方法進(jìn)行篩選，采焉有限稀釋法，經(jīng)過三次競(jìng)隆，最終共獲得了5株針對(duì)VPl蛋白的雜交瘤細(xì)胞系(命名為3A8、3G
5、4、481l、5G6、5C11)，平均染色體數(shù)為9l圭7對(duì)，分泌的單巍隆抗體亞型分別為19A、IgGl、IgG2b、IgGl、lgGl型，輕鏈均為1c鏈。用5株雜交瘤細(xì)胞分泌的單克隆抗體分別與純化后的重組融合蛋白GPV-VPl進(jìn)行Westernblot試驗(yàn)，在GPV-VPl蛋良處均出現(xiàn)明顯的特異性條帶，說明這5株單抗識(shí)別的抗原表位為線性抗原表位。為了進(jìn)一步分析這5株單抗的抗原表位，用本實(shí)驗(yàn)室制備的GPV-VPl截短表達(dá)的19個(gè)重組鬣自，分舅
6、l進(jìn)行Westemblot的鑒定，結(jié)栗顯示有3株單抗麓夠特異性識(shí)別VP(81
7、．136)，1株單抗能夠特異性識(shí)別VP(124．161)，另一株既能識(shí)別VP(81．136)又能識(shí)別VP(124。161)。利用覆蓋VP(81．161)氮基酸序列進(jìn)一步截短表達(dá)的重組蛋白對(duì)這5株肇抗再次進(jìn)行鑒定，根據(jù)結(jié)果初步確定了5株單抗抗原表位的主要功能區(qū)域。本研究制備了針對(duì)GPV結(jié)構(gòu)蛋白的單抗，并初步對(duì)其相應(yīng)抗原表位區(qū)域進(jìn)行了鑒定，對(duì)進(jìn)一步了解GPV的分子抗原特性，建立基于抗原表位水平的特異性診斷方法以及設(shè)計(jì)新型的GPV亞單位疫苗等其有重要意義。關(guān)鍵詞：鵝細(xì)小病毒；VPl蛋白；單克隆抗體；抗原表位Abstract
8、詈詈詈鼉攀皇魯詈IIII,————一IIII—I——————I—————I—————————————i曼ii皇曼!!鼉懋皇曼皇曼鼉麓皇曼曼!皇燃篁曼!!詈鼉鼉魯詈詈詈鼉嬲皇曼皇詈詈黑麓皇詈置詈鼉懋皇曼!!篁燃MonoclonalAntibodiesPreparationandBcellEpitopeDeterminationofMajorStructuralAntigenofGpVAbstractGooseparvovirus(GPV)belongstoParvovirinaeDependovims．GPVinfec
9、tionalsoknown鰱gooseplaque，causesdomesticgoslingsandMuscovyducklingsinfectedundertheageof20days。GPVinfectionisakindofacutehigh-contagiousseptico—infectiondisease．Ithasthefeatureofhi曲mortalityandhighcontagiousness，SOitcanstillbeoneofthemostjeopardizedcontagiousdi
10、sease．OwningtothehindrancetodevelopmentofgooseculturlalindustrybecauseofthediseaSe，thereneedsaccurate，convenientdiagnosticmethodforearlydiagnosisavoidingtheinterferenceofmat
