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《藍舌病病毒17型VP2蛋白單克隆抗體的制備及其抗原表位的鑒定.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第33卷第6期中國預防獸醫(yī)學報Vo1．33．NO．62011年6月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJun．2011doi：10．3969~．issn．1008—0589．2011．06．13藍舌病病毒17型VP2蛋白單克隆抗體的制備及其抗原表位的鑒定王凌鳳，楊濤，孫恩成，耿宏偉，秦永麗，趙晶，蔡緒禹，劉霓紅，李文京，吳東來(1中國農業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術國家重點實驗室／農業(yè)部獸醫(yī)公共衛(wèi)生重點開放實驗室，黑龍江哈爾濱150001；2．中國動物疫病預防控制中心，北京1
2、00125)摘要：為制備藍舌病病毒(BTV)血清17型VP2蛋白的單克隆抗體(MAb)及鑒定其抗原表位，本研究用原核表達系統(tǒng)部分重疊表達的兩段VP2蛋白共同免疫BALB／c小鼠，采用細胞融合技術獲得雜交瘤細胞，通過以重組VP2蛋為白包被抗原的間接ELISA篩選獲得2株穩(wěn)定分泌抗BTv17VP2蛋白的MAbs雜交瘤細胞株，分別命名為3F4和4H10。Ig亞類鑒定2株MAbs均為IgG1／14．鏈。Westernblot證明，2株MAbs均能識別重組VP2蛋白。間接免疫熒光試驗表明：2株MAbs均與BTV17呈陽性反應，其中MAb3F4
3、與BTV1、BTV2、BTV3、BTV5、BTV8、BTV1l、BTV13、BTV16、BTV23、茨城病病毒(IBAV)、牛輪狀病毒(BRV)、牛呼腸孤病毒(RV)均呈陰性反應，但與BTV10和BTV24呈弱陽性反應。利用合成多肽對VP2抗原表住鑒定結果表明，MAb3F4識別的抗原表位為PWNNR，MAb4H10識別的抗原表位為PWNNRA~。本研究結果為建立BTV17型特異性檢測方法及vP2功能研究奠定了基礎。關鍵詞：藍舌病病毒血清17型；VP2；原核表達；單克隆抗體；抗原表位中圖分類號：$852．65文獻標識碼：A文章編號：1
4、008—0589(2011)06—0465—06PreparationofthemonoclonalantibodiesagainstVP2proteinofbluetonguevirusserotype17andtheVP2B—cellepitopeidentificationWANGLing-feng，YANGTao，SUNEn-cheng，GENGHong—wei，QrNYong—li，ZHAOJing，CAIxu-yu，LIuNi-hong，LIWen-jing~，wuDong一1ai(1．StatekeyLaborator
5、yofVeterinaryPublicHealthofMinistryofAgricultural，StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnologyHarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，China；2．ChinaAnimalDiseaseControlCenter，Beijing100125，China)Abstract：Inthisstudy，monoclonala
6、ntibodies(MAbs)againstbluetonguevirus(BTV)serotype17weredevelopedbyfusionthemyelomacellswithspleencellsfromBALB／cmiceimmunizedwithpurified2partialoverlappingrecombinantVP2ofBTV17．TwohybridomacelllinesstablysecretingMAbsagainstVP2ofBTV17，designated3F4and4H10，wereidentif
7、iedbyindirectELISAusingtherecombinantVP2ascoatingantigen．BothofMAbscouldreactwithrecombinantVP2bywesternblot．IndirectimmunofluorescenceassayindicatedthatbothofMAbscouldreactpositivelywithBTV17．butMAb3F4wasshowed*Correspondingauthor收稿日期：2010．11．20基金項目：國家863項目(2007AA02Z4
8、06)；黑龍江省自然科學基因項目(ZJN一0602—01)作者簡介：王凌鳳(1985一)，女，山東煙臺人，碩士研究生，主要從事分子病毒學和分子免疫學研究通信作者：E—mail：dlwu@hvri．ac．cn中國預防獸醫(yī)學報2011年w
