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《抗藍(lán)舌病病毒VP6和VP7蛋白單克隆抗體的制備及鑒定.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、第34卷第5期中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)Ve1．34．NO．52012年5月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineMay．2012doi：10．39698．issn．1008-0589．2012．05．18抗藍(lán)舌病病毒VP6和VP7蛋白單克隆抗體的制備及鑒定魏鵬，孫恩成，劉霓紅，楊濤1,2，徐青元，秦永麗，趙晶，馮瑜菲，一，王文世，張翠云一，吳東來(lái)(1．中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室／農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)公共衛(wèi)生重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室，黑龍江哈爾濱150001；2．東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，黑龍江哈爾濱150030；3．湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)
2、學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙410128)摘要：為制備針對(duì)藍(lán)舌病病毒(BTV)的單克隆抗體(MAb)，本研究利用血清型1型BTV(BTV1)免疫BALB／c鼠，將其脾淋巴細(xì)胞與SP2／0進(jìn)行融合，并用BTV1包被ELISA板，通過(guò)間接ELISA方法篩選出3株穩(wěn)定分泌抗BTV1的MAb的雜交瘤細(xì)胞株(2B10、3D4和4H8)。利用表達(dá)BTV1主要蛋白的真核表達(dá)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染BHK-2l后，對(duì)所制備的雜交瘤細(xì)胞株上清進(jìn)行間接免疫熒光(IFA)以及westernblot鑒定，結(jié)果顯示：2B10和4H8與VP7蛋白反應(yīng)，而3D4與VP6蛋白反應(yīng)。同時(shí)，IFA鑒定結(jié)果進(jìn)一步表明，3株MAb與24個(gè)血清型的BTv
3、均可以發(fā)生反應(yīng)。本研究制備的MAb為建立BTV免疫學(xué)檢測(cè)方法和相關(guān)病毒蛋白的功能研究奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：藍(lán)舌病病毒；單克隆抗體；VP6蛋白；VP7蛋白中圖分類(lèi)號(hào)：$852．65文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1008—0589(2012)05—0412—03PreparationandidentificationofmonoclonalantibodiesagainstVP6andVP7ofbluetonguevirusWEIPeng。，SUNEn-cheng，LIUNi-hong，YANGTao，XUQing—yuan，QIyYong-li，ZHA0Jing，F(xiàn)ENGYu—fei’。，WANG
4、Wen-shi。，ZHANGCui-yun，WUDong—lai(1．KeyLaboratoryofVeterinaryPublicHealth，MinistryofAgricultural，StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology，HarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，China；2．CollegeofAnimalMedicine，NortheastAgriculturalUniversity，Harbin150
5、030，China；3CollegeofAnimalMedicine，HuNanAgriculturalUniversity，Changsha410128，China)Abstract：Toprepareamonoclonalantibody(MAb)againstBluetonguevirus(BTV)，BALB／cmicewereimmunizedwithBTV1andtheimmunizedmicespleenmyelomacellswerefusedwithSP2／0，thenthreeMAbs(2B10，3D4and4H8)againstBTVwerescreenedbyind
6、irectELISAcoatedwithBTV1．TheMAbswereidentifedbyindirectimmunofluorescenceassay(IFA)andwesternblot．theresultsshowedthattheMAbsof2B10and4H8werereactedwithBTVVP6and3D4withVP7protein，whichwereexpressedintransfectedBHK一21cellswitheukaryocyterecombinantplasmids．Furthermore，IFAidentificationindicatedtha
7、talltheMAbswerereactedtoBTV1to24serotypes．TheMAbspreparedinthisstudyoreusefultoolsfordevelopingimmunologicaldiagnostictechniquesofBTVandinvestigatingproteinsrelatedtoBTV．Keywords：bluetonguevirus；monoclonalantibody；VP6；
