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《土撥鼠ctla4+原核表達(dá)和多克隆抗體制備》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、華華華華中中中中科科科科技技技技大大大大學(xué)學(xué)學(xué)學(xué)碩碩碩碩士士士士學(xué)學(xué)學(xué)學(xué)位位位位論論論論文文文文土撥鼠CTLA4的原核表達(dá)和多克隆抗體的制備碩士研究生陳尊義導(dǎo)師陸蒙吉教授華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院病原生物系微生物教研室中文摘要研究背景：土撥鼠肝炎病毒（Woodchuckhepatitisvirus，WHV）屬于嗜肝DNA病毒，與人乙型肝炎病毒（HepatitisBvirus，HBV）關(guān)系十分密切，在基因組結(jié)構(gòu)、病毒[1,2,3]復(fù)制和病毒感染過程等方面都十分的相類似，是目前已知的用于研究乙肝病毒的致病機(jī)制和篩選新的抗病毒藥物，并且在研制新的疫苗
2、中發(fā)揮重要作用的最理想小動(dòng)物模型。目前各國學(xué)者對(duì)乙型肝炎病毒難以清除，如果機(jī)體缺乏有效的T細(xì)胞免疫會(huì)最終導(dǎo)致慢性化這一點(diǎn)是持一致和肯定意見的。注重于探討抗病毒反應(yīng)引起T細(xì)胞活化的相關(guān)因素在以往的研究中多有涉及，但是卻忽略了一個(gè)目前已經(jīng)逐漸認(rèn)識(shí)到了的重要問題：負(fù)調(diào)節(jié)機(jī)制在抑制T細(xì)胞活化方面同樣發(fā)揮重要作用。近年來的許多研究表明乙肝感染程度除了與免疫反應(yīng)的強(qiáng)度有關(guān)之外，它同時(shí)又是一個(gè)被許多細(xì)胞因子相互調(diào)節(jié)的過程，這其中就包括細(xì)胞表面的受體[4]CTLA4。在本研究中，通過分子克隆的手段成功將CTLA4構(gòu)建到原核表達(dá)載體中并在大腸桿菌BL21（D
3、E3）進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，并最終制備了多克隆抗體。這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果為進(jìn)一步完善土撥鼠模型相關(guān)指標(biāo)，檢測(cè)和研究CTLA4在正常、急性、慢性WHV中的表達(dá)，評(píng)估CTLA4在肝炎慢性化中的作用奠定一定的基礎(chǔ)。1華華華華中中中中科科科科技技技技大大大大學(xué)學(xué)學(xué)學(xué)碩碩碩碩士士士士學(xué)學(xué)學(xué)學(xué)位位位位論論論論文文文文目的1.構(gòu)建土撥鼠CTLA4的原核表達(dá)載體并在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)。2.制備了多克隆抗體，同時(shí)檢測(cè)土撥鼠CTLA4的特異性和靈敏性。方法1.應(yīng)用基因工程技術(shù)將土撥鼠的CTLA4的基因片段裝入原核表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化表達(dá)菌后誘導(dǎo)目的蛋白的表達(dá)，應(yīng)用電洗脫方法純化目的
4、蛋白，并用SDS-PAGE和Westernblot對(duì)表達(dá)產(chǎn)物（目的蛋白）進(jìn)行相應(yīng)鑒定。2.用純化的目的蛋白免疫新西蘭大白兔制備多克隆抗體，并純化多克隆抗體。結(jié)果1.通過PCR鑒定、酶切鑒定,并在核酸測(cè)序后與CTLA4的原始序列比對(duì)，結(jié)果表明成功構(gòu)建土撥鼠CTLA4的原核表達(dá)載體。2.用目的蛋白免疫新西蘭大白兔獲得多克隆抗體，采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA），Westernblot等方法對(duì)多克隆抗體的靈敏度和特異性進(jìn)行檢測(cè)。關(guān)鍵詞土撥鼠乙型肝炎原核表達(dá)多克隆抗體2華華華華中中中中科科科科技技技技大大大大學(xué)學(xué)學(xué)學(xué)碩碩碩碩士士士士學(xué)學(xué)學(xué)學(xué)位位位
5、位論論論論文文文文ConstructionofprokaryoticexpressionvectorofCTLA4inwoodchuckandpolyclonalantibodyproductionCandidate:ChenzunyiSupervisor：Prof.MengjiLuDivisionofMicrobiology,DepartmentofPathogenicBiology,TongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandtechnology,Wuhan,ChinaAbstr
6、actBackgroundWoodchuckhepatitisvirus(WHV)iscloselytoHBV,havinghighersimilaritiesinmorphology,genomestructureandgeneproducts,replication,epidemiology,andthecourseofinfection.SothewoodchuckisanveryimportantanimalmodeltoinvestigatethepathogenesisofhepatitisBvirus(HBV)infectio
7、ninhumans.MostresearchaimedatunderstandingthemechanismsunderlyingrecoveryfromHBVinfectionhasbeenfocusedonthefactorsthatleadtotheactivationofantiviralT-cellresponses.Infact,theoutcomeofHBVinfectionvariesaccordingtothevigoroftheimmuneresponse,aprocessthatisalsoregulatedbyanu
8、mberofmolecules,includingthecellsurfacereceptorCTLA-4,whichisaninhibitoryreceptorexpresse
