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1、中國生物制品學(xué)雜志2010年5月第23卷第5期ChinJBiologicalsMay2010，Vol.23No.5·521·中國圖書分類號R373.2+1Q786文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號1004-5503（2010）05-0521-05【實(shí)驗(yàn)技術(shù)】混合補(bǔ)料誘導(dǎo)高拷貝重組畢赤酵母高效表達(dá)X-HBsAg王龍剛王宇凱何成樓覺人楊忠東【摘要】目的對高拷貝重組畢赤酵母表達(dá)X-HBsAg的誘導(dǎo)策略進(jìn)行優(yōu)化。方法在搖瓶中分別誘導(dǎo)1、4、8拷貝數(shù)的重組畢赤酵母，ELISA檢測X-HBsAg的表達(dá)量；在15L發(fā)酵罐中對
2、8拷貝的重組畢赤酵母進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，分別考察甘油濃度對菌體比生長速率的影響、過渡階段混合補(bǔ)料對菌體生長及細(xì)胞相對活性的影響、誘導(dǎo)階段比生長速率對目的蛋白表達(dá)的影響以及誘導(dǎo)階段混合補(bǔ)料對目的蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果8拷貝的重組畢赤酵母在搖瓶中誘導(dǎo)表達(dá)的X-HBsAg量明顯高于1和4拷貝重組子。優(yōu)化的發(fā)酵誘導(dǎo)策略為：初始補(bǔ)加甘油階段控制甘油濃度在15g／L；過渡階段采用甲醇與甘油混合補(bǔ)料，控制甘油濃度在限制性濃度以下；誘導(dǎo)階段采用甲醇與甘油混合誘導(dǎo)X-HBsAg表達(dá)，誘導(dǎo)初始階段控制比生長速率在0.015／
3、h以上，中后期在0.002／h左右；發(fā)酵92h，X-HBsAg的表達(dá)量比單純甲醇誘導(dǎo)提高約67%。結(jié)論混合補(bǔ)料誘導(dǎo)較單純甲醇誘導(dǎo)策略更有利于高拷貝重組畢赤酵母表達(dá)X-HBsAg?！娟P(guān)鍵詞】混合補(bǔ)料；X-HBsAg;高拷貝基因；畢赤酵母；發(fā)酵InductionofHighExpressionofMulti-copyRecombinantX-HBsAgGeneinPichiapastorisbyMixedFeedingWANGLong-gang,WANGYu-kai,HECheng,etal（Shan
4、ghaiInstituteofBiologicalProducts,Shanghai200052,China）【Abstract】ObjectiveTooptimizethestrategyforinductionofhighexpressionofmulti-copyrecombinantX-HBsAggeneinPichiapastoris.MethodsTherecombinantP.pastoriswithone-,four-andeight-copyX-HBsAggeneinshake-
5、flaskculturewerein－duced,andtheexpressionlevelsofX-HBsAgweredeterminedbyELISA.TherecombinantP.pastoriswitheight-copyX-HBsAggenewasinducedin15Lfermentor,andtheeffectsofglycerolconcentrationonspecificgrowthrateofyeast,mixedfeedingattransitionphaseongrow
6、thandrelativeviabilityofyeastcellsaswellasspecificgrowthrateofyeastcellsandmixedfeedingatinductionphaseonexpressionoftargetprotein,wereevaluated.ResultsTheexpressionlevelofeight-copyrecombinantX-HBsAggeneinP.pastorisinshake-flaskculturewassignificantl
7、yhigherthanthoseofone-andfour-copyones.Thestrategyforinductionbyfermentationwasoptimizedasfollows:theglycerolconcentrationatglycerolfeedphasewascontrolledat15g／L;themixedfeedingwithmethanolandglycerolwasadoptedattransitionphase,whiletheglycerolconcent
8、rationwascontrolledbelowtherestrictiveconcentration;themixedinductionwithmethanolandglycerolwasadoptedatinductionphase,inwhichthespecificgrowthrateofyeastcellswascontrolledatmorethan0.015／hatearlystageandabout0.002／hatintermediateandlatestages
