熊果酸對nadph氧化酶亞基在靜止型肝星狀細(xì)胞活化過程中表達(dá)及功能的影響

《熊果酸對nadph氧化酶亞基在靜止型肝星狀細(xì)胞活化過程中表達(dá)及功能的影響》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、分類號：密級：UDC：學(xué)號：406520512402南昌大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文熊果酸對NADPH氧化酶亞基在靜止型肝星狀細(xì)胞活化過程中表達(dá)及功能的影響EffectsofUrsolicacidontheexpressionandfuctionofNADPHoxidasesubunitsduringtheactivationofquiescentHSC余珊珊培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院指導(dǎo)教師姓名、職稱：朱萱教授申請學(xué)位的學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)學(xué)科專業(yè)名稱：內(nèi)科學(xué)（消化）論文答辯日期：2015年6月答辯委員會主席：評閱人：2015年6月一、學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)

2、位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得南昌大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名（手寫）：簽字日期：年月日二、學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解南昌大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)南昌大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用

3、影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編本學(xué)位論文。同時授權(quán)北京萬方數(shù)據(jù)股份有限公司和中國學(xué)術(shù)期刊（光盤版）電子雜志社將本學(xué)位論文收錄到《中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》和《中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》中全文發(fā)表，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)，同意按“章程”規(guī)定享受相關(guān)權(quán)益。學(xué)位論文作者簽名（手寫）：導(dǎo)師簽名（手寫）：簽字日期：年月日簽字日期：年月日論文題目姓名學(xué)號論文級別博士□碩士□院/系/所專業(yè)E_mail備注：□公開□保密（向校學(xué)位辦申請獲批準(zhǔn)為“保密”，年月后公開）I摘要背景：肝纖維化由各種慢性肝損傷引起的肝臟過度修復(fù)反應(yīng)造成，主要以I型膠原為主的細(xì)胞外基質(zhì)（extra

4、cellularmatrix,ECM）在肝臟內(nèi)過度沉積為特征?；罨母涡菭罴?xì)胞（hepaticstellatecells,HSCs）是ECM的主要來源，所以靜止型HSC向活化型HSC激活、轉(zhuǎn)化的過程是肝纖維化的中心事件。煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶（NADPHoxidase,NOX）及其產(chǎn)生的活性氧簇（reactiveoxygenspecies,ROS）誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激被證實(shí)在HSC的激活、轉(zhuǎn)化及肝纖維化發(fā)病及進(jìn)展中具有十分重要的作用。我們前期研發(fā)現(xiàn)中藥單體熊果酸能夠顯著抑制細(xì)胞因子瘦素、AngII及PDGF誘導(dǎo)的活化型HSCs內(nèi)NOX亞基的表達(dá)、NOX活性、NOX來源的RO

5、S產(chǎn)生及其NOX下游PI3K/Akt、p38MAPK信號通路的激活，從而抑制活化型HSCs的增殖、并誘導(dǎo)其凋亡，發(fā)揮抗肝纖維化作用。那么熊果酸干預(yù)是否也能夠通過下調(diào)NOX的表達(dá)而抑制靜止型HSC的活化，早期預(yù)防肝纖維化的發(fā)生，目前尚未闡明。本課題將繼續(xù)在前期研究的基礎(chǔ)上，以健康大鼠原代靜止型肝星狀細(xì)胞為研究對象，以TGF-β為促HSC活化因子，探討熊果酸對靜止型HSC活化過程中NOX亞基表達(dá)的影響及該影響與靜止型HSC激活、轉(zhuǎn)化之間的關(guān)系，進(jìn)一步探討熊果酸抗肝纖維化的作用機(jī)制。目的：探討熊果酸對大鼠靜止型HSC活化過程中NOX亞基表達(dá)的影響，及該影響與靜止型HSC激活、轉(zhuǎn)化之

6、間的關(guān)系。方法：采用肝臟原位灌注及密度梯度離心法從健康SD大鼠體內(nèi)分離提取原代靜止型HSCs，待原代HSCs自然培養(yǎng)至第5天時將細(xì)胞隨機(jī)分成五組并加用不同藥物進(jìn)行處理：空白對照組（control組，細(xì)胞自然培養(yǎng)活化），熊果酸組（UA組，40μM），TGF-β組（5μg/L），熊果酸干預(yù)組（UA+TGF-β組，UA40μM+TGF-β5μg/L），DPI干預(yù)組（DPI+TGF-Β組，DPI10μM+TGF-β5μg/L）。原代HSCsphoxphox經(jīng)加藥處理24h后提取細(xì)胞總蛋白，Westernblot檢測NOX亞基gp91、p22、phoxp67及HSC活化特異性標(biāo)志物α-

7、SMA的蛋白表達(dá)水平。藥物作用12h后采用IphoxRT-qPCR檢測NOX亞基Rac1、p22及I型膠原的mRNA表達(dá)。結(jié)果：1熊果酸對靜止型HSC活化過程中NOX亞基蛋白表達(dá)的影響phox1.1熊果酸對靜止型HSC活化過程中g(shù)p91蛋白表達(dá)的影響phoxTGF-β刺激原代HSCs24h后gp91蛋白水平明顯高于空白對照組phox（P<0.01）；熊果酸組NOX亞基gp91蛋白表達(dá)明顯低于空白對照組（P<0.05）；phox在TGF-β刺激原代HSCs之前加入熊果酸進(jìn)行干預(yù)后gp91蛋白水平較單純ph