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《青稞類黃酮o-甲基轉移酶基因的克隆及原核表達分析》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、Ｉ？’．．分類號Ｓ５１１３０７５學號Ｓ２０１２１１１６■四‘ｊｌｌ巧業(yè)大學顧壬學位論文■’．．、青穗類黃獅０－甲基轉移酶基因的克隆及＾原核表達分祈＊、．．張驗飛．、指導教師馮宗云巧巧學科專業(yè)生物化學與分子生物學－：研究方向植物分子生物學？＼２０１５年５月．＇．？？？？．．．一■■．．？＇■＇＾，．、－■．－．‘：＇，－．．．，Ｉ？－．Ｉ＃．．．．．‘、ｒ．八．ＳｉｃｈｕａｎＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ
2、ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｇｙＭａｓｔｅｒＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎＣｌｏｎｉｎｇａｎｄＰｒｏｋａｒｙｏｔｉｃＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＦ－ｌａｖｏ凸ｏｉｄｓＯｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅＧｅｎｅｉｎＱｉｎｇｋｅ巧山ｌｅｓｓＢａｒｉ巧）ＢｙＫｕｎｆｅｉＺｈａｎｇＡｄｖｉｓｏｒ．：ＰｒｏｆＺｏｎｇｙｕｎＦｅｎｇＭａｏｒ：ＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｊｙｇｙＤｉｒｅｃｔｉｏｎ：ＰｌａｎｔＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙＭａ２０１５ｙ，論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明
3、；所呈交的學位論文是我個人在導師Ｉｔ導下進行研究工作所?。崳姷玫某晒?，，。盡我所知除了文中特別加Ｗ標注和致謝的地方外學位論文中不包含其他個人或集體已經發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得四川農業(yè)大學一或其它教育機構的學位或證書所使用過的材料。與我同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名；關于論文使用授權的聲明本人完全了解四川農業(yè)大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即：學校有權保留并向國家有關部口或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借、閱，可Ｗ采巧影印縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。同意四川農
4、業(yè)大學可Ｗ用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學位論文的全部或部分內容。□本論文不保密。□本論文保密，在。＿＿年解密后適用本授權＂＂（請在Ｗ上□內劃Ｖ）一＾仁廣日研究生簽名：夢備召年月＾導師簽名：７參勺廠年／月／廠日方＞／四川農業(yè)大學碩ｄｒ學位論文摘要青裸（好ｏｒ旅ＷＷＶＭ如！ｒｅＬ．ＷＫＨｏｏｋ．Ｆ．）具有獨特的營養(yǎng)物質和醫(yī)療保?。崳?、成分，能夠有效改善和均衡人體營養(yǎng)，預防結腸癌糖尿病、也血管疾病等多種疾病，＂一＂一且生長環(huán)境特沫，被人們譽為高原空。植物中的甲氧基類黃爾是類重要的次生代謝產物，可改善類黃爾的溶解性，増強代謝穩(wěn)定性和降
5、低毒副作用。同時，具有抗菌抗癌抗肥胖的作用。。因此，富含甲氧基類黃酣的綠色食品越來越受到人們的關注但是甲氧基類黃麗在谷物中含量偏低－，且對類黃麗０甲基轉移酶的酶促反應機理尚＂＂－－１未明確，限制了其廣泛的應用。本研究Ｗ具有較髙黃爾含量的青裸品系９４１９０－－ＯＭｒ７為研究材料，克隆得到了青裸類黃麗甲基轉移酶（好Ｖ餅：）基因，并將其轉一入大腸桿菌中進行原核表達，純化重組蛋白，Ｗ期為下步進行酶功能驗證和催化機理的研究提供依據，為深入挖掘青裸的醫(yī)療保健功能和培育富含高功能成份的青裸品種奠定基礎。得到的主要結果如下：－１．本試驗采用同源克隆方法得到好Ｖ餅：ＯＭ７
6、７基因的ＯＲＦ序列，全長１０７１ｂｐ，編碼３５６個氨基酸，蛋白質的分子式為Ｃ１７２９Ｈ２７００Ｎ４４８Ｏ５０６Ｓ２１，預測蛋白分子量為３８．６５ＫＤａｉ５－．巧。基因序列包含５，ｐ為，屬于酸性蛋白質個植物０甲基轉移酶保守序列，其中保守區(qū)Ｉ和ＩＩ的序列完全保守、ＩＶ、Ｖ與其共有序列相比存在差異。，保守區(qū)田－ＢＬＡＳＴ比對ＯＭＴＮＣＢＩ結果顯示該蛋白酶屬于ｓ。ＩＩ類類黃麗２－．根甲基轉移酶氨基酸序列構建了ＮＪ系統(tǒng)進化樹據植物類黃麗０，該進化樹聚一一。為兩類，其中１６種雙子葉植物親緣關系較近聚為類，１５種單子葉植物聚為類－ＯＭＴ青裸ＨｖＱＫｌ與大麥ＨｖＯＭＴｌ
7、親緣性最化同時與普通小麥、玉米、黑麥草、－野生稻、節(jié)節(jié)麥等禾本科單子葉植物中的類黃爾０甲基轉移酶親緣關系較近，而與－甘廉、芒草、玉米等較遠?？桑卓闯?，青裸、大麥、普通小麥及節(jié)節(jié)麥類黃爾０甲－甲基轉移酶有很高的親緣性基轉移酶在進化上與咖啡酸０。－－合蛋白最佳表達條件為３．構建ＨｖＱＫＯＭＴｌ；終濃ｐＥＴ重組質粒，融°度在巧Ｃ誘導８ｈ，效果最佳，融合表達蛋白約５８ＫＤａ。－４ＳＤＳ－ＰＡＧＥ對ＮＮＴＡＨｖＱＫ－ＯＭＴｌｉ
