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《特發(fā)性無精子癥和嚴重少精子癥患者無精子因子檢測的臨床意義》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文特發(fā)性無精子癥和嚴重少精子癥患者無精子因子檢測的臨床意義姓名：宋寧宏申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：泌尿外科學(xué)指導(dǎo)教師：吳宏飛;蘇建堂20030420南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文特發(fā)性無精子癥和嚴重少精子癥患者無精子因子檢測的臨床意義TheC1inicalSignificanceofhzoospermiaFactorDetectionforthePatientswithIdiopathicAzoospermiaandSevere01igozoospermia南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院泌尿外科教研室研究生宋寧宏導(dǎo)師吳宏飛蘇建堂摘要研究背景據(jù)估計全世界約有10％的育齡
2、夫婦不育，其中接近半數(shù)的原因是精子發(fā)生障礙。在排除輸精管梗阻、克氏癥和其它泌尿生殖系原因后，無精子癥和嚴重少精子癥最有可能的原因就是精子發(fā)生基因的異常。關(guān)于精子發(fā)生基因，特別應(yīng)關(guān)注Y染色體長臂11間隔。Y染色體構(gòu)成人類基因組的2％，由短臂(Yp)和長臂(Yq)組成。1976年Tiepolo和Zuffardi通過對男性不育癥患者Y染色體微缺失的分析，首次提出Y染色體長臂在精子發(fā)生過程中扮演著關(guān)鍵的作用。無精子癥和嚴重少精子癥的細胞遺傳學(xué)和分子生物學(xué)研究也證實：在人類Y染色體上存在著無精子因子(Azoospermiafactor，AZFo通過分子標記物來顯示Y染色體的密度，大量
3、缺失圖譜的研究至少能確定三個清楚的、非重疊的區(qū)域伴有不同程度生精障礙，位于Y染色體長臂的這三個區(qū)域分別命名為AZFa、AZFb和AZFc。據(jù)報道這三個區(qū)域的微缺失能夠干擾精子發(fā)生繼而引起男性不育。在這些區(qū)域里有數(shù)個控制精子發(fā)生的候選基因，它們在人類精子發(fā)生過程中有著重要的功能。1993年，Ma通過對男性不育癥患者的研究首先報道了在Y南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文染色體上一個特殊基因家族的兩個eDNA，也就是RBM(RNAbindingmotif)基因。1995年，ReijO通過對無精子癥患者Y染色體長臂AZFc間隔的研究發(fā)現(xiàn)了DAZ(Deletedinazoospcrmia)基因
4、。RBM、DAZ分別作為AZFb和AZFc區(qū)控制精子發(fā)生的候選基因，它們編碼RNA結(jié)合蛋白，同時對結(jié)合蛋白具有調(diào)節(jié)和代謝作用J—戈一?！?，、對特發(fā)性無精子癥和少精子癥患者病因?qū)W的研究說明應(yīng)該對這類病人進行Y染色體微缺失的檢測。這樣既有利于診斷，同時也可避免一些不必要的治療，因為目前的治療不可能改善精子的數(shù)量。隨著人工輔助生育技術(shù)的發(fā)展，Y染色體微缺失能夠傳遞給男性子孫，這些男性后代同樣面臨著不育的問題。實際上，Kent-FriSt的研究已經(jīng)證實：Y染色體微缺失能夠通過胞漿內(nèi)精子注射(Intracytoplasmicsperminjection，ICSI)傳遞給男性后代。(
5、，因此，我們應(yīng)該把這種可能性告訴給不育癥夫婦，并向他們解釋進行Y染色體微缺失分析的必要性j卜2罔妁^本研究的目的是評估特發(fā)性無精子癥和嚴重少精子癥患者中Y染色體微缺失發(fā)生的頻率，并探討AZF檢測的臨床意義。材料和方法患者組：所有的患者均來自男性不育癥門診，研究的對象為男性特發(fā)性不育患者，年齡28～42歲；50例患者均通過臨床檢查排除精索靜脈曲張、附睪損傷、隱睪、阻塞性無子精癥或其它泌尿生殖系疾患；無精子癥和嚴重少精子癥(2～5×106／m1)患者的精液標本需連續(xù)三次，每次間隔三周，隨后經(jīng)3天禁欲后獲得，并符合世界衛(wèi)生組織(WorldHealthOrganization，WH
6、O)的診斷標準；所有的患者都有正常的46XY核型，性激素檢測正常；此外，38例無精子癥患者石蠟包埋的睪丸組織通過病理檢查均符合精子發(fā)生不完全的診斷。對照組：50例正常男性作為對照，他們均有子女且精子計數(shù)>4xl07／ml。基因組DNA來自患者和正常生育者的外周血標本，通過多重聚合酶鏈反應(yīng)(P01ymeraSechainreaction，PCR)技術(shù)來完成Y染色體微缺失的檢測。南京醫(yī)科火學(xué)碩十學(xué)位論文結(jié)果1．待測的100份標本，經(jīng)PCR檢測均能檢出性別決定基因(Sex-determiningregiOilY，SRY)特異性片段，表明所檢測的DNA模板符合要求，整個擴增系統(tǒng)有效
7、。2，SRY基因片段擴增長度為472bp，與待測的片段(AZFa／SY84、hZFb／YRRM。、AZFc／DAZ)分剮相差146bp、328bp和122bp，四者能夠區(qū)別并以此作為內(nèi)參照。3．50名正常生育男性標本均可見SRY、SY84、YRRM，(RBM。)和SY254(DAZ)擴增帶，表明無AZF因子微缺失。4．50例患者標本中均可見SRY及SY84擴增帶，表明無AZFa／SY84微缺失。5．50例患者標本中有6例(無精子癥4例；嚴重少精子癥2例)可見SRY擴增帶，但未見SY254擴增帶，表明有AZFc／DA
