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《桃果實(shí)PpPFK基因的電子克隆及低溫脅迫下的轉(zhuǎn)錄水平分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、現(xiàn)代食品科技ModernFoodScienceandTechnology2013,Vol.29,No.9桃果實(shí)PpPFK基因的電子克隆及低溫脅迫下的轉(zhuǎn)錄水平分析111211余芳，王可，邵興鋒，龔一富，王鴻飛，許鳳（1.寧波大學(xué)食品科學(xué)與工程系，浙江寧波315211）（2.寧波大學(xué)生物與海洋科學(xué)系，浙江寧波315211）摘要：為了克隆桃果實(shí)中PpPFK（Prunuspersicaphosphofructokinase，磷酸果糖激酶）基因，并對(duì)其序列和不同低溫脅迫下的轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行分析。本研究采用了電子克隆和RT-PCR(reversetranscriptionPCR)相結(jié)合的
2、方法分離桃果實(shí)PpPFK基因的cDNA全長(zhǎng)序列，采用RT-qPCR(reversetranscriptionreal-timequantitativePCR)技術(shù)分析桃果實(shí)在0℃、5℃冷藏過程中目的基因轉(zhuǎn)錄水平的變化。試驗(yàn)成功獲得了全長(zhǎng)1405bp的PpPFK基因序列，該序列具有完整的開放閱讀框（ORF，openreadingframe），編碼232個(gè)氨基酸。對(duì)ORF進(jìn)行PCR的驗(yàn)證結(jié)果和電子克隆的結(jié)果一致。序列分析顯示該基因的氨基酸序列同大豆和葡萄具有很高的相似度。RT-qPCR分析顯示，5℃貯藏下的桃果實(shí)PpPFK基因轉(zhuǎn)錄水平在前14d高于0℃果實(shí)，這可能導(dǎo)致5℃貯藏
3、的桃果實(shí)發(fā)生更明顯的冷害癥狀。本研究結(jié)果表明，桃果實(shí)PpPFK轉(zhuǎn)錄水平在不同低溫貯藏過程中存在差異，這可能在桃果實(shí)低溫脅迫響應(yīng)過程中發(fā)揮重要作用。關(guān)鍵詞：桃；磷酸果糖激酶；電子克??；轉(zhuǎn)錄水平；調(diào)控文章篇號(hào)：1673-9078(2013)9-2125-2130InSilicoCloningandTranscriptLevelAnalysisofPpPFKinPeachFruitStoredatDifferentLowTemperaturesYUFang1,WANGKe1,SHAOXing-feng1,GONGYi-fu2,WANGHong-fei1,XUFeng1(1.De
4、partmentofFoodScienceandEngineering,NingboUniversity,Ningbo315211,China)(2.DepartmentofBiologyandMarineScience,NingboUniversity,Ningbo315211,China)Abstract:InordertoclonePpPFK(Prunuspersicaphosphofructokinase)geneandanalyzeitstranscriptlevelsofpeachfruitstoredatdifferentlowtemperatures,Pp
5、PFKgenecompletecDNAlengthwasisolatedwithinsilicocloningmethodandRT-PCR(reversetranscriptionPCR),anditstranscriptlevelsofpeachfruitstoredat0℃and5℃wereexaminedthroughreversetranscriptionreal-timequantitativePCR(RT-qPCR).ThePpPFKgenewith1405bpwasgained,whichcodes232aminoacidswithanORF(openre
6、adingframe).TheORFchecktestwasconductedandtheresultsuggestedthatthesequenceofPpPFKgenethroughPCRwasthesameasthatinsilicocloning.TheaminoacidsequenceofPpPFKgeneinpeachfruitwasverysimilartothatofGlycinemaxandVitisvinifera.TheRT-qPCRanalysisofPpPFKgeneindicatedthatitstranscriptlevelsofpeachf
7、ruitstoredat5℃werehigherthanthatat0℃duringfirst14days,resultinginanobviouschillinginjuryofpeachfruitstoredat5℃.TheseresultsrevealedthatPpPFKwascoldresponsegene,anddifferentialresponsesexistedinpeachfruitstoredatlowtemperatures,indicatingitsimportantroleinlowtemperat
