天然藥物化學成分提取分離鑒定方法與技術(色譜法)

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1、第二章提取分離鑒定的方法與技術——色譜法1碳酸鈣（固定相）色素混合液石油醚(流動相）1906年，Tsweet發(fā)現(xiàn)色譜分離現(xiàn)象色譜柱色帶2“像光譜中的光線一樣，色素混合物的不同組分有規(guī)律地排列在碳酸鈣柱上而彼此分離?！薄猅sweet,《德國植物學報》,1906.3柱色譜薄層色譜紙色譜高效液相色譜色譜法（Chromatography）一、色譜法在研究天然藥物有效成分中的應用：分離混合物精制化合物鑒定化合物4二、原理：利用混合物中各成分在固定相和移動相中吸附、分配及其親和力的差異而達到分離。色譜的三要素固定相移動相被分離物質

2、5三者相互關系？按原理不同可分為：吸附色譜法*分配色譜法*離子交換色譜法凝膠濾過色譜法（分子篩濾過色譜）大孔吸附樹脂法高效液相色譜法（自學）氣相色譜法（自學）6三、分類：吸附色譜法*（AdsorptionChromatography)1）原理：利用吸附劑對混合物中各成分分子吸附能力的差異而達到分離的色譜法。2）分類：物理吸附化學吸附半化學吸附78物理吸附*：化學吸附：半化學吸附：“相似者易吸附”避免氫鍵形成能力分子間力，無選擇性，可逆。硅膠、氧化鋁、活性炭化學鍵，選擇性較強，常不可逆。硅膠----生物堿堿性氧化鋁----

3、黃酮、蒽醌等氫鍵，選擇性較弱，多可逆。聚酰胺3）吸附色譜的三要素固定相（吸附劑）移動相（溶劑）被分離物質9溶解能力流動相溶質吸附劑吸附作用競爭在液-固吸附色譜中，溶質的保留和分離選擇性決定于下列三個因素：10吸附作用11硅膠：適用于中性和酸性成分氧化鋁：適用于中性和堿性成分活性炭：非極性吸附劑聚酰胺：高分子聚合物,氫鍵吸附極性吸附劑a、吸附劑（固定相）12硅膠（silica）SiO2?XH2O酸性、親水性吸附劑。結構：內部----硅氧交聯(lián)結構→多孔結構→范德華力表面----有硅醇基→氫鍵吸附適用于中性或酸性親脂性成分的分

4、離。13特性：1）極性吸附劑，“相似者易吸附”物質極性↑，吸附能力↑2）吸水→失活105～110OC烘干30分鐘(可逆失水)→吸附力最大500OC烘干(不可逆失水)→活性喪失，無吸附力注意：活化溫度不宜高，不宜分離堿性物質。氧化鋁（aluminiumoxide）極性吸附劑，最適于分離植物中的堿性或中性的親脂性成分。有酸性、堿性和中性三種規(guī)格。吸附特性與硅膠類似，但堿性氧化鋁不宜分離酸性物質。14聚酰胺（polyamide）結構：--[CH2-CO-NH-]-n原理：氫鍵吸附學說15酰氨基與化合物（羥基、羧基及醌基）形成氫

5、鍵吸附。16用途：分離黃酮類、酚類、醌類、有機酸類及鞣質。影響吸附強弱的因素：1、流動相：水＞甲醇或乙醇＞丙酮＞氯仿＞稀氨水＞甲酰胺;2、分子結構：a、形成氫鍵數(shù)目多，吸附能力強。b、形成分子內氫鍵，吸附力減弱。C、芳香化合物中，共軛雙鍵多，吸附牢?；衔锝Y構對聚酰胺吸附作用的影響形成氫鍵的數(shù)目成鍵基團位置雙鍵的數(shù)目分子內氫鍵17課本第33頁活性炭（activatedcarbon）非極性吸附劑，對非極性物質具有較強的親和力，在水中對溶質表現(xiàn)出強的吸附能力。從活性炭上洗脫被吸附的物質時，溶劑的極性越小，洗脫能力越強。18特

6、別適合水溶性物質的分離。b、溶劑（移動相）遵循“相似相溶”及“相似者易吸附”原理：極性吸附劑，溶劑的介電常數(shù)愈大，洗脫能力愈強；非極性吸附劑，溶劑的介電常數(shù)愈大，洗脫能力愈弱。c、被分離物質遵循“相似相溶”及“相似者易吸附”原理：對于極性吸附劑而言：被分離成分極性大，吸附牢，難以洗脫；被分離成分極性小，吸附力弱，容易洗脫。19一般化合物的極性按下列官能團的順序增強：—CH2—CH2—，—CH2=CH2—，—OCH3，—COOR，>C=O，—CHO，—NH2，—OH，—COOH四、操作方式1、薄層色譜法（TLC）*定義：將

7、吸附劑均勻的鋪在平板上，把要分離分析的樣品點加到薄層色譜板上，然后用適當?shù)娜軇┫到y(tǒng)展開，在一定的條件下顯色或直接在日光或紫外光下觀察所獲得的斑點，從而達到分離、分析、鑒定的目的。201）薄層色譜的吸附劑和支持劑：在選用吸附劑或支持劑時，一般是根據被分離物質的化學性質來選用。當不了解被分離物質的化學性質時，可以先選用最常用的硅膠或氧化鋁，如果分離效果不好，可再改用其他的吸附劑或支持劑。21常用的硅膠吸附劑粒徑：200-300目種類：硅膠G——硅膠+粘合劑煅石膏硅膠GF254——含有熒光物質硅膠H——不含粘合劑煅石膏硅膠HF

8、254——含有熒光物質22常用的展開劑正己烷、環(huán)己烷、四氯化碳、甲苯、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮、乙醇、甲醇、水23理想的溶劑應能使混合物分離后各組分的Rf值相差盡可能大，且盡量在0.2-0.8之間。當單一溶劑不能很好地展開各組分時，常選擇用混合溶劑作為展開劑。2）薄層色譜的一般操作a、制板b、活化c、點樣d、展開