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《副溶血性弧菌鞭毛蛋白FlaA的重組表達與多克隆抗體制備》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、副溶血性弧菌鞭毛蛋白FlaA的重組表達與多克隆抗體制備王燕，夏雨，王周平(江南大學食品學院，江蘇無錫214122)摘耍：副溶血性弧菌是廣泛存在于水產(chǎn)品中的革蘭陰性致病菌。鞭毛蛋白FlaA是副溶血性弧菌所特冇的蛋白并在其侵染宿主、引起宿主免疫反應過程屮起到重要作用，由鞭毛蛋白免疫動物得到的抗體可以作為檢測副溶血性弧菌污染的探針。本研究通過分子牛物學方法構(gòu)建了重組FlaA的農(nóng)達載體pET28a-FlaA,經(jīng)1PTG誘導獲得FLaA的人量表達。該重組蛋口以可溶性蛋白形式存在，經(jīng)Ni-NTA親和柱純化后對家兔進行免疫，得到濃度為24.32mg/mL、效價為1:1
2、25,000的FlaA抗體。通過間接EL1SA實驗，測得該抗體與副溶血性弧菌反應的靈敏度為lE4cfti/mL,H該抗體與五種其它常見致病菌無明顯交義反應。關鍵詞：副溶血性弧菌；鞭毛蛋口；克隆農(nóng)達；抗體制備中圖分類號:TS201.6;TS201.2RecombinantexpressionandpolyclonalantibodypreparationofVibrioparahaemolyticusflagellinAWANGYan,XIAYu,WANGZhouping(SchoolofFoodScienceandTechnology,JiangnanU
3、niversity,JiangSuWuXi214122)Abstract:TheGramegativebacteriumVibrioparahaemolyticusisacommonpathogenicbacteriainaquaticproducts?FlagellinA,whichisauniqueproteininthisstrain,playsanimportantroleduringinfectionandinductionofthehostimmuneresponse?Theproductionofpolyclonalantibodyagai
4、nstFlaAproteincanbeusedasaprobeinV.parahaemolyticusfastdetection.TherecombinantplasmidpET28a-FlaAwasconstructedandtheFlaAwasexpressedwithinductionofIPTG.ThesolubleFlaAproteinwaspurifiedbyNi-NTAaffinitychromatographyandthepolyclonalantibodyagainstFlaAwaspreparedbyimmunningrabbit.T
5、hefinalconcentrationofFlaAantibodywas24.32mg/mLwiththetiterof1:125,000.TheresultofFlaApolyclonalantibodysensibilityis1E4cfu/mL.TheFlaApolyclonalantibodyshowednocross-reactionwith5otherkindsofpathogenicbacteria?Keywords:Vibrioparahaemolyticus;FlagellinA;recombinantexpression;prepa
6、rationofployclonalantibodyo引言副溶血性弧菌(Vibrio是一種革蘭陰性嗜鹽弧菌，廣泛存在丁?魚類、貝類等海產(chǎn)品中，是導致海水養(yǎng)殖經(jīng)濟動物弧菌病的主要致病菌。山于空運的發(fā)展，食用新鮮海產(chǎn)品的人群和地域在不斷擴增，而由V.parahaemolyticus引起的食物中毒，人群暴露規(guī)模及發(fā)生規(guī)模呈明顯上升趨勢，已經(jīng)高居微生物性食物中毒的首位⑴。對于該菌引起的感染進行免疫預防已冇了初步的嘗試[2],而在監(jiān)測相關產(chǎn)品特別是水產(chǎn)品中該菌的污染情況方面：傳統(tǒng)的細菌檢驗方法耗時費力，獲得結(jié)果通常需要幾天的時間；以核酸為基礎的多重PCR法和熒光定
7、量PCR法及核酸分子雜交法則需要昂貴的儀器；近年，山于檢測時間短、靈敏度高、不需要復雜儀器，基于抗原抗體反應的免疫學檢測方法受到了普遍關注。然而無論是ELISA雙抗體夾心法還是免疫膠體金法都需要特杲性強、靈敏度高基金項目：教育部新世紀優(yōu)秀人才支持訃劃(NCET-11-0663),教育部酋士點博導基金(No.20110093110002)。作者簡介：王燕(1988J,女，碩士研究生，營養(yǎng)與食品衛(wèi)生學通信聯(lián)系人：王周平(1974-),男，教授，營養(yǎng)與食品衛(wèi)生E-mail:wangzp@jiangnan.edu.cn的抗體探針。在已報道的研究中，最為常見的是全
8、菌免疫多克隆抗體和致病因了TLH蛋白免疫多克隆抗體。日前，探究其他特異性更強、靈
