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《副溶血性弧菌鞭毛蛋白FlaA的重組表達(dá)與多克隆抗體制備》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、副溶血性弧菌鞭毛蛋白FlaA的重組表達(dá)與多克隆抗體制備王燕，夏雨，王周平(江南大學(xué)食品學(xué)院，江蘇無錫214122)摘耍：副溶血性弧菌是廣泛存在于水產(chǎn)品中的革蘭陰性致病菌。鞭毛蛋白FlaA是副溶血性弧菌所特冇的蛋白并在其侵染宿主、引起宿主免疫反應(yīng)過程屮起到重要作用，由鞭毛蛋白免疫動(dòng)物得到的抗體可以作為檢測(cè)副溶血性弧菌污染的探針。本研究通過分子牛物學(xué)方法構(gòu)建了重組FlaA的農(nóng)達(dá)載體pET28a-FlaA,經(jīng)1PTG誘導(dǎo)獲得FLaA的人量表達(dá)。該重組蛋口以可溶性蛋白形式存在，經(jīng)Ni-NTA親和柱純化后對(duì)家兔進(jìn)行免疫，得到濃度為24.32mg/mL、效價(jià)為1:1
2、25,000的FlaA抗體。通過間接EL1SA實(shí)驗(yàn)，測(cè)得該抗體與副溶血性弧菌反應(yīng)的靈敏度為lE4cfti/mL,H該抗體與五種其它常見致病菌無明顯交義反應(yīng)。關(guān)鍵詞：副溶血性弧菌；鞭毛蛋口；克隆農(nóng)達(dá)；抗體制備中圖分類號(hào):TS201.6;TS201.2RecombinantexpressionandpolyclonalantibodypreparationofVibrioparahaemolyticusflagellinAWANGYan,XIAYu,WANGZhouping(SchoolofFoodScienceandTechnology,JiangnanU
3、niversity,JiangSuWuXi214122)Abstract:TheGramegativebacteriumVibrioparahaemolyticusisacommonpathogenicbacteriainaquaticproducts?FlagellinA,whichisauniqueproteininthisstrain,playsanimportantroleduringinfectionandinductionofthehostimmuneresponse?Theproductionofpolyclonalantibodyagai
4、nstFlaAproteincanbeusedasaprobeinV.parahaemolyticusfastdetection.TherecombinantplasmidpET28a-FlaAwasconstructedandtheFlaAwasexpressedwithinductionofIPTG.ThesolubleFlaAproteinwaspurifiedbyNi-NTAaffinitychromatographyandthepolyclonalantibodyagainstFlaAwaspreparedbyimmunningrabbit.T
5、hefinalconcentrationofFlaAantibodywas24.32mg/mLwiththetiterof1:125,000.TheresultofFlaApolyclonalantibodysensibilityis1E4cfu/mL.TheFlaApolyclonalantibodyshowednocross-reactionwith5otherkindsofpathogenicbacteria?Keywords:Vibrioparahaemolyticus;FlagellinA;recombinantexpression;prepa
6、rationofployclonalantibodyo引言副溶血性弧菌(Vibrio是一種革蘭陰性嗜鹽弧菌，廣泛存在丁?魚類、貝類等海產(chǎn)品中，是導(dǎo)致海水養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)動(dòng)物弧菌病的主要致病菌。山于空運(yùn)的發(fā)展，食用新鮮海產(chǎn)品的人群和地域在不斷擴(kuò)增，而由V.parahaemolyticus引起的食物中毒，人群暴露規(guī)模及發(fā)生規(guī)模呈明顯上升趨勢(shì)，已經(jīng)高居微生物性食物中毒的首位⑴。對(duì)于該菌引起的感染進(jìn)行免疫預(yù)防已冇了初步的嘗試[2],而在監(jiān)測(cè)相關(guān)產(chǎn)品特別是水產(chǎn)品中該菌的污染情況方面：傳統(tǒng)的細(xì)菌檢驗(yàn)方法耗時(shí)費(fèi)力，獲得結(jié)果通常需要幾天的時(shí)間；以核酸為基礎(chǔ)的多重PCR法和熒光定
7、量PCR法及核酸分子雜交法則需要昂貴的儀器；近年，山于檢測(cè)時(shí)間短、靈敏度高、不需要復(fù)雜儀器，基于抗原抗體反應(yīng)的免疫學(xué)檢測(cè)方法受到了普遍關(guān)注。然而無論是ELISA雙抗體夾心法還是免疫膠體金法都需要特杲性強(qiáng)、靈敏度高基金項(xiàng)目：教育部新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持訃劃(NCET-11-0663),教育部酋士點(diǎn)博導(dǎo)基金(No.20110093110002)。作者簡(jiǎn)介：王燕(1988J,女，碩士研究生，營養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)通信聯(lián)系人：王周平(1974-),男，教授，營養(yǎng)與食品衛(wèi)生E-mail:wangzp@jiangnan.edu.cn的抗體探針。在已報(bào)道的研究中，最為常見的是全
8、菌免疫多克隆抗體和致病因了TLH蛋白免疫多克隆抗體。日前，探究其他特異性更強(qiáng)、靈
