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1、慢病毒轉(zhuǎn)染增強劑說明書產(chǎn)品描述：
Polybrene（聚凝胺）是一種多聚陽離子聚合物，常用于哺乳動物細胞的DNA轉(zhuǎn)染實驗以增強脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率。Polybrene目前廣泛用于逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染，慢病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染，作用機理可能是通過中和細胞表面唾液酸與病毒顆粒之間的靜電排斥從而促進吸附作用。Polybrene也是一種有名的抗肝素劑（肝素拮抗劑），常用來生產(chǎn)非特異性凝集的紅細胞。另外Polybrene也多用于蛋白測序，因為小劑量的Polybrene在自動測序分析可明顯改善多肽的降解現(xiàn)象。PVDF膜加入polybrene還能提高膜的親和性。
注：
2、Polybrene對某些細胞（如末端分化的神經(jīng)元，DC細胞）毒性較大，初次應(yīng)用建議先做毒性測試[1]。
基本屬性：
別?名：1,5-dimethyl-1,5-diazaundecamethylenepolymethobromide
CASNo.：28728-55-4
純?度：≥94%(titration)
溶解方法：溶于水，溶解能力高達10%。0.9%Nacl溶液配制1mg/mL的儲存液，可以濾膜除菌或高壓滅菌。
保存與穩(wěn)定性：粉末2-8℃保存，避免潮濕。1mg/mL儲存液2-8℃，至少一年保持穩(wěn)定。
操作步驟（僅作參考）：
實驗1：逆轉(zhuǎn)錄病毒感染（
3、Retroviral?Infection）
（1）?重組逆轉(zhuǎn)錄病毒原液的制備：取5ml生長培養(yǎng)基（5%血清）加入約含單層轉(zhuǎn)染逆轉(zhuǎn)錄包裝細胞的100mm培養(yǎng)盤內(nèi)。孵育24h后，吸去培養(yǎng)液并用0.45μm濾器過濾。
（2）待感染細胞的培養(yǎng)：100mm培養(yǎng)盤內(nèi)加入10ml完全培養(yǎng)基，細胞密度為5×105/盤。
（3）病毒感染：細胞培養(yǎng)24h后，吸去完全培養(yǎng)液。用含polybrene的2ml病毒上清?（或?qū)⒉《驹合♂尩?ml）感染細胞，polybrene的終濃度為5μg-10μg/ml。37°C孵育3-6h。
（4）收集病毒顆粒：加入8ml完全培養(yǎng)基。感染
4、3天后，按照1:5的比例用選擇培養(yǎng)基裂解細胞。
實驗2：轉(zhuǎn)染
（1）完全生長培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞,培養(yǎng)細胞密度約50%；
（2）孵育細胞18-24h后準備DNA-培養(yǎng)基-?Polybrene混合液，按如下操作制備混合液：①添加完全培養(yǎng)基（60mm培養(yǎng)皿2ml，100mm培養(yǎng)皿3ml），37°C預(yù)熱；②添加10ng~10μg質(zhì)粒輕輕混勻；③加入Polybrene至終濃度為5μg-10μg/ml。輕輕混勻。以上每個成分需要按順序加入。
（3）去除培養(yǎng)基，在細胞中加入DNA-培養(yǎng)基-Polybrene溶液，在37°C孵育細胞6-20h。細胞培養(yǎng)的前6h內(nèi)約每1.
5、5h輕柔混勻。
（4）去除DNA-培養(yǎng)基-Polybrene溶液。用DMSOshocksolution（15%DMSOin?1XHBSS）輕輕蓋住細胞（60mm培養(yǎng)
（5）立即去除DMSOshocksolution，用完全生長培養(yǎng)基輕輕清洗細胞2次。對于60mm培養(yǎng)皿每次用5ml培養(yǎng)液清洗，100mm培養(yǎng)皿每次用10ml培養(yǎng)液清洗。皿3ml，100mm培養(yǎng)皿4ml）。每次加入溶液時用手輕晃培養(yǎng)盤10s，使得液體均勻分布。然后37°C孵育細胞4min。
（6）加入完全培養(yǎng)基到細胞中；
（7）穩(wěn)定轉(zhuǎn)化：去除生長培養(yǎng)基，按照1:5的比例用選擇培養(yǎng)基裂解細胞
6、。
瞬時表達：去除生長培養(yǎng)基，加入新鮮的生長培養(yǎng)基。24-72h后收獲細胞。
使用濃度（詳細步驟見文獻）：
Polybrene的具體使用濃度依據(jù)細胞種類，轉(zhuǎn)染方法等影響，以下使用濃度僅作參考。
（1）為提高腺病毒轉(zhuǎn)染效率和LacZ轉(zhuǎn)基因表達，使用6μg/ml?Polybrene處理病毒載體后轉(zhuǎn)入BHK-21細胞（MOI為100），轉(zhuǎn)染率提高到95%，沒有用Polybrene處理的只有2.3%轉(zhuǎn)染率[2]。
（2）在KSHV(Kaposi’ssarcoma-associatedherpesvirus)純化和轉(zhuǎn)染實驗中，濃縮的病毒與8μg/mlPolyb
7、rene加到BCBL-1細胞中37℃下孵育2h[3]。
（3)?在逆轉(zhuǎn)錄病毒構(gòu)建研究中，用v-rasHa逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染角質(zhì)細胞（Keratinocytes）后在含有4μg/mlPolybrene培養(yǎng)基中培養(yǎng)3天，病毒滴度為1×107?virus/ml，MOI為1[4]。
（4)?在shRNA編碼的慢病毒載體的轉(zhuǎn)染研究中，病毒上清中加入8μg/mlPolybrene，轉(zhuǎn)染到HEK293細胞中[5]。
（5)?在慢病毒shRNA轉(zhuǎn)染研究中，將含有6μg/mlPolybrene的新鮮培養(yǎng)基加入到培養(yǎng)24h的RCC10細胞中，用慢病毒顆粒轉(zhuǎn)染細胞[6]。
