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《鵝盲腸產(chǎn)纖維素酶細菌的分離鑒定及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、摘要纖維素作為世界上最豐富的有機物質(zhì)，然而其資源并沒有得到充分的開發(fā)利用，甚至有很大一部分纖維素變成環(huán)境污染物。關(guān)于有纖維素分解能力的微生物研究報道很多，這些微生物大部分是從植物殘體及土壤中分離的。從動物腸道內(nèi)分離纖維素分解菌的研究很多，但多是從反芻動物瘤胃中分離得到的。目前，關(guān)于鵝盲腸分解纖維素的細菌的研究很少。作為草食動物的鵝，其對纖維素類物質(zhì)有很強的消化能力。因鵝的盲腸中棲息著很多微生物，所以部分學(xué)者認為鵝盲腸和反芻動物瘤胃一樣具有發(fā)酵功能。為了充分利用纖維素，本實驗對鵝盲腸纖維素分解菌進行了分離鑒定，并優(yōu)化其發(fā)酵產(chǎn)酶的條件，研究酶的性質(zhì)，為該菌的應(yīng)
2、用及研究奠定一定的基礎(chǔ)。本試驗隨機選6只揚州白鵝，公母各一半。饑餓處理24h，處死，取其盲腸，從其內(nèi)容物中分離出一株有纖維素分解能力的細菌，通過DNS法測定其發(fā)酵培養(yǎng)上清-1液酶活力值為1.25U*mL。通過形態(tài)學(xué)和16SrDNA鑒定，并做系統(tǒng)進化樹，發(fā)現(xiàn)該菌株與解淀粉芽孢桿菌親緣關(guān)系最近，命名為BacillusamyloliquefaciensS1。通過單因素和正交試驗，對B.amyloliquefaciensS1產(chǎn)纖維素酶條件進行優(yōu)化，得到其最適發(fā)酵條件：發(fā)酵溫度為37℃、發(fā)酵時間為72h、發(fā)酵培養(yǎng)基起始pH為6.0、裝液量為75mL/250mL；各因
3、素對B.amyloliquefaciensS1產(chǎn)酶能力影響的大小順序依次為：pH值>培養(yǎng)時間=培養(yǎng)溫度>裝液量。研究B.amyloliquefaciensS1纖維素酶的酶學(xué)性質(zhì)，結(jié)果顯示，該菌所產(chǎn)纖維素酶的最適催化反應(yīng)溫度為60℃，pH為7，該酶耐熱，耐酸堿，對纖維素類物質(zhì)的分3++2+2+2+解作用較廣泛。Fe對該纖維素酶活力有一定的抑制作用，而K、Cu、Fe、Mn2+和Zn對酶活力都有顯著的促進作用。試驗克隆得到B.amyloliquefaciensS1的一種纖維素酶基因，該基因ORF片段大小為1500bp，編碼499個氨基酸，該序列在Genbank與
4、已有序列進行BLAST比對分析，發(fā)現(xiàn)與其它解淀粉芽孢桿菌的纖維素酶基因有97％-99％的同源性，用MEGA5.1軟件對其進行進化樹分析，鑒定本試驗克隆得到的基因序列為解淀粉芽孢桿菌纖維素酶基因序列。把B.amyloliquefaciensS1纖維素酶基因插入到pET-28(a+)載體，并成功在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達，產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳分析和Westernblotting檢測，分子量約為55kD。關(guān)鍵詞：鵝盲腸，解淀粉芽孢桿菌，纖維素酶，酶學(xué)性質(zhì)，原核表達IAbstractCelluloseisthemostabundantorganicsonthe
5、earth.Buttheresourceisunderutilizedandevenmostofthembecameoneoftheenvironmentalpollutants.Therearealotofstudiesonthecellulolyticmicroorganismsandmostofthecellulolyticstrainswereisolatedfromdifferentfermentedplantresiduesandsoil.Somecellulolyticstrainsfromanimalhadbeenisolated,andm
6、ostofthemwereisolatedfromruminant.Toourknowledge,thestudyofcellulolyticbacteriumisolatedfromthececumofgoosewasrare.Thegoose,asherbivores,hadhighdigestibilitytodietfiber.Thereisalotofmicroorganismingoosecaecum,soithasbeenconsideredthatthefermentationfunctionofgoosecaecumissameasrum
7、en.Inordertoenhancetheutilizationofcelluloseresources,cellulolyticmicroorganismsfromgeesececumhadbeenisolatedandidentified.Thenthepropercultureconditionsofcellulaseandpropertiesofthecellulasewerestudied,andtheexperimentmaylayacertainfoundationfortheresearchandapplicationofthebacte
8、ria.Inthisstudy,six3-monthofYangz
