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1、Salsolinol合成酶的克隆表達(dá)及其生物功能的研究馮程程2015年1月中圖分類號(hào)：UDC分類號(hào)：Salsolinol合成酶的克隆表達(dá)及其生物功能的研究作者姓名馮程程學(xué)院名稱生命學(xué)院指導(dǎo)教師鄧玉林教授答辯委員會(huì)主席費(fèi)也淳教授申請(qǐng)學(xué)位理學(xué)碩士學(xué)科專業(yè)生物學(xué)學(xué)位授予單位北京理工大學(xué)論文答辯日期2015年1月22日Molecularcloning,expressionandbiologicalfunctionofSalsolinolSynthaseCandidateName：ChengchengFengSchoolorDepartment:SchooloflifescienceFacultyMe
2、ntor:Prof.YulinDengChair,ThesisCommittee：Prof.YechunFeiDegreeApplied:MasterMajor：BiologyDegreeby:BeijingInstituteofTechnologyTheDateofDefence：January22，2015研究成果聲明本人鄭重聲明：所提交的學(xué)位論文是我本人在指導(dǎo)教師的指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作獲得的研究成果。盡我所知，文中除特別標(biāo)注和致謝的地方外，學(xué)位論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得北京理工大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書所使用過(guò)的材料。與我一同工作的合作者對(duì)此研究工
3、作所做的任何貢獻(xiàn)均已在學(xué)位論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。特此申明。簽名：日期：北京理工大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要帕金森?。≒arkinson’sdisease,PD）是一種常見(jiàn)于中老年人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，研究發(fā)現(xiàn)生物體內(nèi)存在一類由多巴胺（Dopamine，DA）衍生而來(lái)的MPTP結(jié)構(gòu)類似物——兒茶酚異喹啉類物質(zhì)(CAIQs)。Salsolinol（6,7-二羥基-1,2,3,4-四氫異喹啉，Sal）作為一種能在人腦和尿液中檢測(cè)到的內(nèi)源性兒茶酚異喹啉類物質(zhì)，在一定條件下，它及其衍生物能引起多巴胺能神經(jīng)元的死亡從而參與PD致病過(guò)程。Sal合成酶（Salsolinolsynthase）是兒茶
4、酚異喹啉類物質(zhì)合成代謝過(guò)程中的首個(gè)關(guān)鍵酶，它是一種催化多巴胺和乙醛生成多巴胺能神經(jīng)毒性物質(zhì)Salsolinol的酶，直接影響到Sal及其衍生物在體內(nèi)的代謝過(guò)程。研究證實(shí)Sal合成酶存在于鼠腦中，通過(guò)對(duì)純化的Sal合成酶進(jìn)行氨基酸序列分析獲得其氨基酸序列。研究發(fā)現(xiàn)Sal合成酶氨基酸序列與泛素有94.8%的相似性，由此可通對(duì)泛素基因定點(diǎn)突變獲取Sal合成酶基因。本文采用PCR技術(shù)擴(kuò)增Sal合成酶基因，將其連接到原核載體pET28a和真核表達(dá)載體pcDNA4上，獲得重組質(zhì)粒，并將其轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21和真核HEK細(xì)胞中。Sal合成酶基因在細(xì)菌和細(xì)胞內(nèi)大量表達(dá)，SDS-PAGE電泳結(jié)果及Weste
5、rn-blot顯示出分子量約為12KD特異性蛋白質(zhì)條帶，與Salsolinol合成酶蛋白分子量大小一致。經(jīng)親和層析分離得到純化的Salsolinol合成酶蛋白。通過(guò)三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)Sal合成酶的催化活性，結(jié)果表明過(guò)量表達(dá)的Sal合成酶體現(xiàn)出較高的活性，證明前期獲得的蛋白基因所表達(dá)的蛋白具有Sal合成酶活性。關(guān)鍵詞：帕金森病Salsolinol合成酶克隆和表達(dá)純化酶活I(lǐng)北京理工大學(xué)碩士學(xué)位論文AbstractParkinson’sdisease(PD)isachronicprogressiveneurodegenerativedisorder.Therehavebeenincreasin
6、gevidencesindicatingtheendogenousdopamine-derivedcatecholisoquinolineswhosestructureissimilarwithMPTP,maybeapossiblecandidateofdopaminergicneurotoxinstoelicitPD.Salsolinol(6,7-dihydroxy-1,2,3,4-tetrahydro-isoquinoline,Sal)asonekindofendogenouscatecholisoquinoline,itcanbedetectedinhumanbrainandurine
7、.Salsolinolsynthaseisoneofthemostimportantenzymesinvolvedintheformationofcatecholisoquinolineneurotoxin.Itisanovelenzymewhichcancondensatedopamineandacetaldehydetosalsolinol,andcausesthedeathofdopaminergicn
