抑制自噬在視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞光損傷中的保護(hù)作用.pdf

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1、o"-C-<-a-5":二。一二—抑制自噬在視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞光損傷中的保護(hù)作用作者姓名：張?zhí)熨Y專業(yè)名稱：眼科學(xué)研究方向：視網(wǎng)膜光損傷的機(jī)制研究指導(dǎo)教師：蘇冠方教授學(xué)位類別：醫(yī)學(xué)博士培養(yǎng)單位：吉林大學(xué)第二醫(yī)院論文答辯日期：二年（月日授予學(xué)位日期：年月曰論文評(píng)閱人答辯委員會(huì)組成姓名職稱工作單位姓名職稱工作單位原慧萍教授哈爾濱醫(yī)科大學(xué)主席原慧萍教授哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院附屬第二醫(yī)院吳倉怡教授山東大學(xué)齊魯醫(yī)院委員張曉梅教授哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院陳曉隆教授中國醫(yī)科大學(xué)蘇冠方教授吉林大學(xué)第二醫(yī)院劉平教授哈

2、爾濱醫(yī)科大學(xué)吳雅臻教授吉林大學(xué)第二醫(yī)院房學(xué)迅教授吉林大學(xué)生命科學(xué)院鄭雅娟教授吉林大學(xué)第二醫(yī)院未經(jīng)本論文作者的書面授權(quán)，依法收存和保管本論文書面版本、電子版本的任何單位和個(gè)人，均不得對(duì)本論文的全部或部分內(nèi)容進(jìn)行任何形式的復(fù)制、修改、發(fā)行、出租、改編等有礙作者著作權(quán)的商業(yè)性使用（但純學(xué)術(shù)性使用不在此限）。否則，應(yīng)承擔(dān)侵權(quán)的法律責(zé)任。吉林大學(xué)博士學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交學(xué)位論文，是本人在指導(dǎo)教師的知道下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或機(jī)體已經(jīng)

3、發(fā)表或撰寫過的作品成果，對(duì)本文的研究作出重要的個(gè)人和集體，均在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名日期：年廣月日刖過強(qiáng)的光或長時(shí)間直視光源會(huì)對(duì)視網(wǎng)膜造成的一定程度的損害，稱為視網(wǎng)膜光損傷。不同波長的光對(duì)視網(wǎng)膜組織的損傷機(jī)制不同，主要有熱損傷、機(jī)械損傷和光化學(xué)損傷，其中光化學(xué)損傷是最常見的類型。特別隨著手機(jī)、電腦等電子產(chǎn)品的廣泛普及和眼科光學(xué)診療器械應(yīng)用日漸增多，各種光源所致的視網(wǎng)膜損傷問題愈發(fā)引起人們的注意。此外，視網(wǎng)膜光損傷的病理過程與年齡相關(guān)性黃斑變性、視網(wǎng)

4、膜色素變性等難治性眼底疾病有許多相似之處，視網(wǎng)膜光損傷會(huì)造成感光細(xì)胞的損傷、凋亡、生物膜溶解和細(xì)胞壞死，引發(fā)眼病，甚至導(dǎo)致視力喪失。目前對(duì)視網(wǎng)膜光損傷機(jī)制的探討尚有待于進(jìn)一步深入，而且至今尚無有效的治療方法。自噬是真核細(xì)胞生物一種保守的降解并回收胞質(zhì)內(nèi)蛋白質(zhì)或受損細(xì)胞器的過程，自噬與凋亡相互作用，共同完成細(xì)胞程序性死亡的進(jìn)程。自噬是否可以引起視網(wǎng)膜感光細(xì)胞的光損傷，其作用機(jī)制和途徑如何，是本實(shí)驗(yàn)研究的著眼點(diǎn)。細(xì)胞是光感受器細(xì)胞很好的替代細(xì)胞，我們以細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，研究發(fā)現(xiàn)：可見光照射可以誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生自噬

5、現(xiàn)象，而抑制自噬可以有效地保護(hù)細(xì)胞免受損害，信號(hào)途徑的活化是光致細(xì)胞死亡的關(guān)鍵。這些研究結(jié)論使我們對(duì)于視網(wǎng)膜光損傷相關(guān)疾病中感光細(xì)胞死亡的分子機(jī)制有了更為清晰的認(rèn)識(shí)，為進(jìn)一步尋求一種理想的治療方法提供了新的思路。中文摘要抑制自噬在視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞光損傷中的保護(hù)作用自噬是一種保守的細(xì)胞自我退化的過程，在細(xì)胞生長關(guān)鍵時(shí)期如發(fā)育階段或營養(yǎng)缺乏時(shí)常常對(duì)細(xì)胞發(fā)揮保護(hù)作用。然而，有時(shí)自噬也參與細(xì)胞凋亡進(jìn)程。光感受器細(xì)胞是唯一直接暴露在光照下將光刺激轉(zhuǎn)換為視覺信號(hào)的神經(jīng)元細(xì)胞。但過強(qiáng)的光照射對(duì)視網(wǎng)膜仍具有細(xì)胞毒性作

6、用。至今為止，視網(wǎng)膜光損傷的確切機(jī)制尚不明確，并且臨床上仍無有效治療方案，特別是自噬在光誘導(dǎo)感光細(xì)胞凋亡中的作用機(jī)制有待進(jìn)一步探討。光照對(duì)誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生自噬的作用目的：通過不同的自噬檢測方法，觀察可見光照射對(duì)細(xì)胞自噬的影響。方法：（利用可見光處理傳代培養(yǎng)后的細(xì)胞株，建立光感受器細(xì)胞光損傷模型。利用檢測分析自噬標(biāo)志性蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)水平，以及利用電子顯微鏡對(duì)自噬體形態(tài)學(xué)變化進(jìn)行觀察。（應(yīng)用和兩種不同的自噬抑制劑對(duì)細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理后，通過染色進(jìn)行細(xì)胞死亡百分比定量評(píng)估，觀察抑制自噬對(duì)細(xì)胞光損傷保護(hù)作用的影響。

7、結(jié)果：在光強(qiáng)度照射的細(xì)胞中表達(dá)水平明顯增強(qiáng)，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中的比例明顯高于對(duì)照組細(xì)胞，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。經(jīng)過天光照后，細(xì)胞表現(xiàn)出典型的自噬特性，一些胞內(nèi)物質(zhì)如細(xì)胞器被包繞在雙層膜囊內(nèi)，成為自噬小體。（應(yīng)用的光照前分鐘對(duì)細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理，細(xì)胞死亡比例從下降至其最佳濃度在左右；細(xì)胞與的預(yù)孵化，細(xì)胞死亡率從減少至，在顯示出最好的保護(hù)作用。其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：光照是誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生自噬的關(guān)鍵，而且阻斷自噬可以有效地保護(hù)感光細(xì)胞免受損害。信號(hào)途徑對(duì)光誘導(dǎo)細(xì)胞自噬的影響目的：研究在可見光照射條件下，信號(hào)途徑對(duì)細(xì)胞活性

8、的影響，探討自噬在光誘導(dǎo)感光細(xì)胞凋亡中的作用機(jī)制。方法：（利用可見光處理傳代培養(yǎng)后的細(xì)胞株，建立光感受器細(xì)胞光損傷模型。（利用檢測磷酸化，磷酸化，磷酸化的表達(dá)水平，通過染色對(duì)抑制劑，抑制劑和抑制劑預(yù)處理后的細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞死亡百分比定量評(píng)估。（在指定時(shí)間內(nèi)收集細(xì)胞裂解，利用檢測和磷酸化后和表達(dá)水平的變化，以及通過染色觀察自噬小體內(nèi)溶酶體生成情況。結(jié)果：（收集細(xì)胞裂解，對(duì)磷酸化，磷酸化，磷酸化的表達(dá)水平進(jìn)行蛋白免疫印跡分析，實(shí)驗(yàn)組（磷酸化組）掃描