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《棘孢木霉幾丁質(zhì)酶基因tachi1在畢赤酵母中的高效表達(dá).pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、萬方數(shù)據(jù)HighLevelExpressionofChitinaseGene(tachil)fromTrichodermaasperelluminPichiapastorisThesissubmittedtoQjngdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofScienceTangWei(CollegeofLifeScience)SupervisorAssociateProLXianH,LgquaneSOF"Associaro!Xian
2、HongonanQingdao·China萬方數(shù)據(jù)獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得青島農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名：枷砷時(shí)間：加fy年彳月諺日關(guān)于論文使用授權(quán)的說明本人完全了解青島農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，
3、可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意青島農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。(保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議)研究生簽名：導(dǎo)師簽名：柄腳威佬庭時(shí)間：2．ofz年占月治時(shí)間：加，>年6月湔萬方數(shù)據(jù)青島農(nóng)業(yè)大學(xué)摘要棘孢木霉幾丁質(zhì)酶基因tachil在畢赤酵母中的高效表達(dá)摘要幾丁質(zhì)酶作為木霉菌防治植物病蟲害的主要因子，在生物防治和環(huán)境保護(hù)等領(lǐng)域發(fā)揮著重要的作用。為了研究棘孢木霉(Trichodermaasperellum)幾丁質(zhì)酶及其酶學(xué)性質(zhì)，明確生防機(jī)制，將棘孢木霉幾丁質(zhì)酶基因tachil
4、(不舍信號(hào)肽)克隆到分泌性表達(dá)載體pPIC9K上，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pPIC9K／tachil，電擊轉(zhuǎn)化畢赤酵母GSll5，篩選獲得了高效分泌表達(dá)幾丁質(zhì)酶Taehil的酵母工程菌GS．tachil．K，對(duì)其進(jìn)行甲醇誘導(dǎo)培養(yǎng)，通過單因素和正交試驗(yàn)對(duì)Tachil的表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化，純化目的蛋白并進(jìn)行酶擎}生質(zhì)的研究。結(jié)果表明，GS．tachil—K的最佳表達(dá)條件o．pH為6．5，甲醇誘導(dǎo)濃度為O．5％，起始細(xì)胞濃度為0／)600=2，甲醇誘導(dǎo)時(shí)間為180h；幾丁質(zhì)酶TachiI活力可達(dá)17．93U／mL，蛋白表達(dá)量為6．19g／L；表達(dá)的幾丁質(zhì)酶表
5、觀分子量約為44kDa，酶反應(yīng)最適的溫度和pH分別為50℃和5．5，具有較寬的溫度、pH適用范圍；50℃以下保持較高的酶活力，在堿性條件下穩(wěn)定性較差；米氏常數(shù)玉，m和最大反應(yīng)速度p，舭。分別為6．537g／L和47．37x103lunol／L·min；TachiI受Ag+、H礦+、cu2+、Fe2+和高濃度的SDS及p．巰基乙醇強(qiáng)烈抑制．幾丁質(zhì)酶基因tachil生物信息學(xué)分析顯示，該基因鳊碼424個(gè)氨基酸；Taehil屬于糖基水解酶18家族內(nèi)切幾丁質(zhì)酶，包含SIGGW底物結(jié)合位點(diǎn)和FDGIDVDWE活性中心位點(diǎn)，信號(hào)肽長度為22個(gè)氨基酸；含有
6、1個(gè)潛在的N．糖基化位點(diǎn)；二級(jí)結(jié)構(gòu)以(it．螺旋、D．折疊和無規(guī)則卷曲為結(jié)構(gòu)元件，三級(jí)結(jié)構(gòu)為(彬p)8的圓桶形結(jié)構(gòu)．重組幾丁質(zhì)酶可抑制多種病原真菌茵絲生長、孢子萌發(fā)和芽管伸長，其中對(duì)板栗疫病病菌、楊樹腐爛病病菌和蘋果腐爛病病菌的菌絲生長抑制作用較強(qiáng)。關(guān)鍵詞：棘孢木霉；凡丁質(zhì)酶；畢赤酵母；基因表達(dá)萬方數(shù)據(jù)青島農(nóng)業(yè)大學(xué)AbstmctHighLevelExpressionofChitinaseGene(tachil)fromTrichodermaasperelluminPichiapnstorls●lAbstractChitinases，[Iret
7、houghttobeamajorfactorforresistingplantpestsanddiseasesbyTrichoderma，andplayanimportantroleinbiologicalcontrolandenvironmentalprotection．Inordertostudybio-controlmechanismandobtainehitinaseproductions，andclearthecharacterizationofchitianasefromZasperellum，inthisstudy,arecom
8、binantplasmidpPIC9Khaehilwasconstructedbyinsertinggenetachi!(withoutsignalpeptide)
