[精品]原代細胞培養(yǎng)操作.doc

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1、原代細胞培養(yǎng)操作取材:2.3.4.用另一無菌的剪刀和銀子切開腹部，取出含有胚胎的子用簸緲位左使孕鼠迅速死亡O把整個孕鼠浸入盛有75%乙輕的燒杯中數秒鐘消毒，取出后放在大平皿中攜入超凈臺。用無菌的銀子和剪子在前腿下作一履做水嚴勿口，用無菌銀子將皮膚扯向后腿。宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。5.剔除胚胎周圍的包膜（若胚胎較大，應剪去頭、爪），將[=1胚胎放于無菌的含有平衡鹽溶液的培養(yǎng)皿中。用平衡鹽溶液漂洗胚胎至清洗液清亮。切割（2人一組）:6.7.將部分胚胎轉移至一個無菌小瓶中，用平衡鹽溶液漂洗。然后用眼科手術剪刀小心地反復剪切胚胎

2、，直到成lmn?8.左右的小塊，再用平衡鹽溶液清洗組織塊至清洗液清亮。靜置數分鐘，使組織塊自然沉淀到管底，棄去上清。消化、接種培養(yǎng)（2人一組入9.視組織塊量加入5—6倍的0.25%胰酶液（約3ml）,37°C中消化20—40分鐘，每隔5分鐘振蕩一次。10.靜置，吸去上清，加2ml細胞生長液，用吸管反復吹打組織塊，使細胞分離，靜置，使未分散的組織塊下沉。11.取部分細胞懸液接種至加了細胞生長液（約3ml）的培養(yǎng)瓶中（若計數，按每細胞瓶1XIO，'細胞的數量接種），置于37°C,二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)3?5天觀察結果。