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1、第3l卷第3期2叭2年8月臺(tái)灣海峽JOURNAL0F0CEANOGRAPHYINTAIWANSTRAITV01．31．No．3Aug．，2012海綿共附生微生物中具有0(一葡萄糖苷酶抑制活性菌株的篩選與初步鑒定查鑫壺1，靳翠麗1’2，陳毓遒1，繆莉1’2?，朱曉雯1，周曉見(jiàn)1’2(1．揚(yáng)州大學(xué)環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院，江蘇揚(yáng)州225127；2揚(yáng)州大學(xué)海洋科學(xué)與技術(shù)研究所，江蘇揚(yáng)州225127；3．上海藥物研究所新藥研究國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海201203)摘要：通過(guò)建立僅一葡萄糖苷酶抑制劑篩選模型，對(duì)美國(guó)圣璜島海域海綿共附生微生物發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行
2、活性篩選．其中，儀．葡萄糖苷酶活性測(cè)試反應(yīng)體系是在96孔酶標(biāo)板中進(jìn)行，在Q一葡萄糖苷酶濃度為0．008U／cm3，pH值為6．8，反應(yīng)溫度為37cC及測(cè)定生成物波長(zhǎng)為405nm的基礎(chǔ)上，優(yōu)化篩選模型．結(jié)果表明，模型的最佳篩選條件：底物PNPG的濃度為10mmol／dm3、活性測(cè)試反應(yīng)時(shí)間為25min，樣品溶劑DMsO含量為2％(∥y)．以d一葡萄糖苷酶抑制劑阿卡波糖作為陽(yáng)性對(duì)照樣品，根據(jù)優(yōu)化后的抑制活性篩選模型對(duì)212株海綿共附生微生物的粗提物樣品進(jìn)行篩選．結(jié)果表明：19株微生物的粗提物抑制率大于50％；其中，抑制活性最高的5株菌株
3、的粗提物，在濃度為0．4、0．6、0．8mg／cm3時(shí)，其抑制活性均在70％以上，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于阿卡波糖的最高抑制率58％(1．6mg／cm’)．其中菌株HY。娟粗提物濃度在0．4mg／cm3時(shí)，仍具有很高的儀一葡萄糖苷酶抑制率79．3％．通過(guò)16srDNA序列測(cè)定與分析，鑒定該菌株為堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌(日oc珊瑚．聲r(shí)m眥)．堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌代謝產(chǎn)物能顯著抑制僅一葡萄糖苷酶活性，這為研制新型d一葡萄糖苷酶抑制劑提供了有力的線索，對(duì)堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌有待作進(jìn)一步的研究．關(guān)鍵詞：海洋微生物學(xué)；海綿共附生微生物；僅一葡萄糖苷酶抑制劑；抑制活性；菌株鑒定DOl
4、：10．3969／J．ISSN．1000—8160．2012．03．012中圖分類(lèi)號(hào)：P735文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1000—8160(2012)03-0380旬7在廣闊的海洋里生存著數(shù)以萬(wàn)計(jì)的生物，海洋生物的種類(lèi)和多樣性遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出陸地生物．由于海洋生態(tài)環(huán)境的特殊性，使得海洋生物擁有與陸生生物不同的生理和代謝功能．近幾十年，人們通過(guò)對(duì)海洋生物的不斷探討，從海洋動(dòng)植物及微生物中分離鑒定出上萬(wàn)種天然活性物質(zhì)。1七J．其中，海綿是最原始的多孔形無(wú)脊椎生物，是海洋天然產(chǎn)物的重要來(lái)源．近年來(lái)，從海綿中分離的結(jié)構(gòu)新穎、藥理活性顯著的天然產(chǎn)物有萜
5、類(lèi)、生物堿類(lèi)、聚醚類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)、多肽類(lèi)等舊J．海綿體內(nèi)有著非常復(fù)雜的微生物生態(tài)系統(tǒng)，其共附生微生物群落占海綿干重的40％左右，最高可達(dá)，70％．研究發(fā)現(xiàn)，從海綿中所獲得的活性物質(zhì)實(shí)際上是由海綿共附生的微生物所產(chǎn)生的，每年有上百種的新化合物及其新功能被發(fā)現(xiàn)和研究，并且這些活性化合物都被證明與海綿共附生微生物有關(guān)[4-5。．僅．葡萄糖苷酶(d—glucosidase)是存在于人體小腸粘膜細(xì)胞刷狀緣上的酶，它對(duì)生物體內(nèi)新陳代謝的生化反應(yīng)起著關(guān)鍵作用．人們從食物中攝取淀粉等多糖，通過(guò)體內(nèi)代謝最終以?xún)x一葡萄糖苷酶的作用變成葡萄糖，進(jìn)入血液形
6、成血糖，但血糖過(guò)高會(huì)增加糖尿病的發(fā)病率，在研制抗糖尿病的藥物過(guò)程中，人們發(fā)現(xiàn)僅一葡萄糖苷酶抑制劑具有可逆地占據(jù)僅一葡萄糖苷酶與糖結(jié)合位點(diǎn)的特點(diǎn)，從而能夠抑制＆．葡收稿日期：2012旬1旬4基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(41076097，4l006097，4l106113)；教育部科學(xué)技術(shù)研究重點(diǎn)項(xiàng)目資助項(xiàng)目(2l1065)；江蘇省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(BK2010322)；上海藥物研究所新藥研究國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放課題資助項(xiàng)目(SIMMl106KF_09)；江蘇省教育廳高校自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(11KJBl70011)作者簡(jiǎn)介：
7、查鑫矗(1986～)，女，碩士研究生；E—mail：chaxjnyao@163．com通訊作者：周曉見(jiàn)(1976～)，男，副教授；E．mail：zhou—xiaoiian@yzu．edu．cn3期查鑫壺，等：海綿共附生微生物中具有d一葡萄糖苷酶抑制活性菌株的篩選與初步鑒定萄糖苷酶催化多糖降解為單糖，限制或延緩多糖在消化道內(nèi)分解∞‘7J．儀一葡萄糖苷酶抑制劑作為降糖藥物，最初是從細(xì)菌(放線菌屬、鏈酶菌屬)中提取獲得哺J．隨著研究的深入，人們從天然動(dòng)植物及海洋生物中分離出一系列的僅一葡萄糖苷酶抑制劑，主要類(lèi)型有生物堿類(lèi)、類(lèi)黃酮類(lèi)、萜類(lèi)和
8、多酚類(lèi)等化合物及其衍生物一。?．其中，理．葡萄糖苷酶抑制劑如阿卡波糖、伏格列波糖、米格列醇在臨床上已得到廣泛應(yīng)用¨1。13J．另外，研究發(fā)現(xiàn)，d一葡萄糖苷酶抑制劑除了具有治療糖尿病的獨(dú)特療效，在生物學(xué)中還可以作為調(diào)整細(xì)胞代謝功能的重要
