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《酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)人葉酸受體抗體IgM方法的建立及評(píng)價(jià)-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào)ACTAACADEMIAEMEDICINAESINICAE·論著·酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)人葉酸受體抗體IgM方法的建立及評(píng)價(jià)楊娜，王琳琳，袁悅，葉榮偉，任愛國(guó)北京大學(xué)生育健康研究所衛(wèi)生部生育健康重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室北京大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)系，北京100191通信作者：王琳琳電話：010—82802976，傳真：010-82801141，電子郵件：linlinwang@bjmu．edu．cn摘要：目的建立酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)人血漿葉酸受體抗體IgM的方法。方法將從正常分娩健康產(chǎn)婦的胎盤中提取、純
2、化人葉酸受體蛋白稀釋至5ng／l，作為抗原包被96孔板，以羊抗人IgM作為二抗，以健康人混合血漿作為標(biāo)準(zhǔn)品，濃度設(shè)定為1。采用ELISA檢測(cè)人血漿葉酸受體抗體IgM水平，并評(píng)價(jià)該方法的靈敏度、精密度和穩(wěn)定性。分別以人葉酸受體蛋白和牛源葉酸結(jié)合蛋白作為包被蛋白，檢測(cè)24例健康新生兒母親和20例神經(jīng)管畸形患兒母親的血漿標(biāo)本葉酸受體抗體IgM水平，比較兩種包被蛋白的檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果ELISA方法可以檢測(cè)的人血漿葉酸受體抗體IgM濃度為6．25×10～～8．00X10_，最低檢測(cè)限為3．12×10～。該方法檢測(cè)高、中和低濃度血漿葉酸受體
3、自身抗體IgM的批內(nèi)差異分別為6．61％、3．50％和5．12％，批問(wèn)差異分別為4．54％、5．49％和5，44％，此方法檢測(cè)不同稀釋倍數(shù)樣品中葉酸受體自身抗體IgM濃度的測(cè)定值均在均數(shù)±10％范圍內(nèi)。人葉酸受體包被檢測(cè)板測(cè)得的健康新生兒母親(t=一11．9，P<0．001)及神經(jīng)管畸形患兒母親(t=7．35，P<0．001)的葉酸受體抗體lgM濃度均顯著高于牛源葉酸結(jié)合蛋白包被檢測(cè)板的測(cè)定值。結(jié)論本研究成功建立了檢測(cè)人血漿葉酸受體抗體IgM的ELISA方法，該方法以人葉酸受體蛋白作為包被蛋白，檢測(cè)靈敏度高，精密度好，結(jié)果穩(wěn)定
4、。關(guān)鍵詞：葉酸受體；葉酸受體自身抗體；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)；IgM中圖分類號(hào)：R17文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1000—503X(2014)04—0410—05DOI：10．3881／j．issn．1000—503X．2014．04．O11EstablishmentandEvaluationofEnzyme-linkedImmunosorbentAssayforMeasuringHumanIgMAutoantibodytoFolateReceptorYANGNa，WANGLin—lin，YUANYue，YERong—wei，RENA
5、i'guoPekingUniversityInstituteofReproductiveandChildHealth，theKeyLaboratoryonReproductiveHealthofMinistryofHealth，DepartmentofEpidemiologyandHealthStatistics，SchoolofPublicHealth，PekingUniversity，Beijing100191，ChinaCorrespondingauthor：WANGLin·linTel：010—82802976．Fax
6、：010—82801141，E·mail：linlinwang@bjmu．~du．cnABSTRACT：ObjectiveToestablishthemethodofenzyme—linkedimmunosorbentassay(ELISA)formeasuringhumanIgMautoantibodytofolatereceptor．MethodsFolatereceptorwasextractedandpurifiedfromthehealthywomanplacenta．Theproteinwascoatedon96一
7、wellplateswithaconcentrationof5as／tx1．GoatmoB—oclonalantibodywasusedfordetectingantibody．PooledplasmafromhealthydonorswasusedtoplotthestandardcurveandtheIgMconcentrationofpooledplasmawasdefinedas1．WesetupanELISAproceduretomeasurehumanIgMautoantibodytofolatereceptor．
8、Thesensitivity，precision，andstabilityofthemethodwereevalua-ted．Fu~her，thefolatereceptorandbovinefolate—bindingproteinwereusedastheantigen，
