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《雞滑液支原體LAMP快速可視化檢測方法的建立-論文.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在應用文檔-天天文庫。
1、第36卷第1期中國預防獸醫(yī)學報Vo1．36．NO．12014年1月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJan．2014doi：10．3969~．issn．1008—0589．2014．01．12雞滑液支原體LAMP快速可視化檢測方法的建立鄧顯文，謝芝勛，謝志勤，劉加波，龐耀珊，謝麗基，范睛，羅思思f廣西獸醫(yī)研究所廣西畜禽疫苗新技術重點實驗室，廣西南寧530001)摘要：為建立能夠快速檢測雞滑液支原體(Ms)的檢測方法，本研究根據(jù)GenBank中MS熱休克ATP依賴蛋白酶基因
2、的保守序列，設計了一套特異性環(huán)介導等溫擴增(LAMP)引物，建立了MS的LAMP可視化檢測方法。該方法的敏感性可達10z拷貝DNA，高于常規(guī)PCR方法lO倍；全部反應可以在1h內(nèi)完成；可以通過肉眼觀察鈣黃綠素顏色變化直接判定結果；對其它常見病原體的檢測結果均為陰性。結果表明建立的LAMP方法簡便、快速、靈敏、特異，可以用于MS感染的快速檢測。關鍵詞：雞滑液支原體；LAMP；檢測中圖分類號：$852．6文獻標識碼：A文章編號：1008-0589(2014)01-0046—04Developmentofaloop—mediate
3、disothermalamplificationassayforvisualdetectionofMycoplasmasynoviaeDENGXian．wen，XIEZhi—xun，XIEZhi—qin，LIUJia-bo，PANGYao—shan，XIELidi，F(xiàn)ANQing，LUOSi—si(GuangxiVeterinaryResearchInstitute，GuangxiKeyLaboratoryofAnimalVaccinesandNewTechnology，Nanning530001，China)Abstrac
4、t：ToestablishrapiddetectionmethodforMycoplasmasynoviaedetection，aloop—mediatedisothermalamplification(LAMP)assaywasdevelopedwithasetofprimersdesignedaccordingtotheconservativesequenceoftheheatshockATP—dependentproteasegeneofM．synoviaeinGenBank．Undertheoptimizedreac
5、tionconditions，theamplificationcompletedwithinonehourinaconstantwaterbathat62℃．ThedetectionresultsshowedthattheassaywasspecifictoM．synoviaewithadetectionlimitof10copies，whichwashigherthantheroutinePCR，andnocross-reactionswiththeotherpathogenofchicken．Inaddition，the
6、positiveresultwasvisibleinpresenceofCalcein．ThesedatasuggestthatthisLAMPassayisasimpleandspecificmethodforrapiddetectionofM．synoviaeinclinicalsamples．Keywords：Mycoplasmasynoviae；LAMP；detection滑液支原體(Mycoplasmasynoviae，MS)以侵害然快速、敏感性較高，但是需要使用昂貴的儀器和雞關節(jié)滑液、腱鞘膜和氣囊為主，引起雞亞臨
7、床型試劑等。環(huán)介導等溫擴增技術(LAMP)具有簡捷、成的上呼吸道感染和關節(jié)滑液囊炎。雞群感染該病可本低廉和結果可視化等優(yōu)點『5]，目前在一些病原微以導致明顯的跛行，生長發(fā)育遲緩及胴體降級等?。生物的檢測中被廣泛應用[6-13]。目前，國內(nèi)外還沒有快速檢測MS是采取緊急防制措施和凈化MS的前應用LAMP檢測雞MS的研究報導。本實驗以MS提。目前MS．PCR檢測技術已有報道，該方法雖熱休克ATP依賴的蛋白酶(HeatshockATP．dependent*Correspondingauthor收稿日期：2013．02—20基金項目
8、：廣西特聘專家專項(2011B020)；國家百千萬人才工程人選專項(945200603)；廣西科技重大專項(1222003-2—4)作者簡介：鄧顯文(1963一)，男，廣西賀州人，研究員，主要從事動物分子生物學研究．通信作者：E．mail：xiezhixun@126．corn第1期鄧顯文，
