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《LAMP快速檢測犬傳染性肝炎方法的建立及應用-論文.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、2014年第31卷第8期LAMP快速檢測犬傳染性肝炎方法的建立及應用曹丙蕾，凌宗帥，邱洪凱(1．濟南出入境檢驗檢疫局，山東濟南250014；2．山東正邦養(yǎng)殖有限公司，山東濟南250010)摘要：根據GenBank上公布的犬腺病毒I型(CAV-I)E3基因序列，設計了3對特異性環(huán)介導等溫擴增(LAMP)引物，以CAV-IDNA為模板，通過條件優(yōu)化建立了犬傳染性肝炎LAMP快速檢測方法，該方法能夠在63℃恒溫下30min內實現(xiàn)目的核酸的大量擴增，在可見光下即可直接觀察擴增產物熒光顏色變化來判定結果。特異
2、性和靈敏度試驗表明，該LAMP檢測方法只對CAV-I有特異性擴增，對其他無關核酸無擴增。與常規(guī)PCR檢測相比，LAMP的檢測靈敏度較好，最低檢出限為10～TCID是PCR檢測方法的100倍。臨床樣品檢測結果表明，LAMP陽性檢出率為36％，與病毒分離鑒定的結果符合率達96．8％，與PCR檢測的結果符合率達100％，且快速簡便，成本低，適用于基層實驗室的快速疾病診斷。關鍵詞：LAMP；犬傳染性肝炎；犬腺病毒I型中圖分類號：$855．3文獻標識碼：A文章編號：1005—944X(2014)08．0073
3、．04EstablishmentandApplicationofLAMPfortheRapidDetectionofInfectiousCanineHepatitisCaoBinglei，LingZongshuai，QiuHongkai(1．JinanEntry—ExitInspectionandQuarantineBureau，Jinan，Shandong250014；2．ShandongZhengbangBreedingGroupCO．，LTD．，Jinan，Shandong250010)Abs
4、tract：Todeveloparapidmethodforthedetectionofinfectiouscaninehepatitis，LAMPwasestablishedusingthreepairsofspecificprimersfortheE3geneofCAV—IaccordingtothesequencesinGenBank．Theassaywasoptimizedtoobtainabigamountofamplificationproductsat63℃for30minandthe
5、amplificationproductscouldbeobservedbythenakedeyes．ItwasshownthattheLAMPwasabletospecificallyamplifyCAIDNA，withoutcross-reactionwithOtherirrelevantnucleotidesanditwas100timesmoresensitivethanPCRassaywithalowestdetectionlimitvalueof10TCIDn／0．1mL．Thedete
6、ctionofclinicalsamplesshowedthatthepositiverateofLAMPwas43％．Inaddition，theagrcementratebetweenLAMPandthevirusisolationwas96．8％butbetweenLAMPandPCRwasupto100％．LAMPwasmoresensitiveandsimpleandcouldbeappliedtorapiddiagnosisofCAI．Keywords：LAMP：infectiousca
7、ninehepatitis：canineadenovirusI犬傳染性肝炎(infectiouscaninehepatitis，ICH)藍眼病)[3-4]o該病以剛斷乳到一歲以內的幼犬感是由犬腺病毒I型(canineadenovirusI，CAV_I)染率和死亡率為最高，死亡率可高達400／0[2]。本病感染引發(fā)的犬的一種急性敗血性傳染病。該病于在世界范圍內流行，既嚴重威脅著家養(yǎng)寵物的身體1925年首次被發(fā)現(xiàn)]，1984年，我國首次分離到健康，又對我國養(yǎng)犬業(yè)、皮毛動物養(yǎng)殖業(yè)等危害較該病毒，CAV-I
8、在臨床上可導致犬傳染性肝炎、狐大，給養(yǎng)犬業(yè)和寵物愛好者帶來巨大的經濟損失。貍和熊腦炎等疾病的發(fā)生[2】。臨床上以肝小葉中心突然發(fā)病和出血時間延長是犬傳染性肝炎的暗壞死、肝實質細胞和皮質細胞核內出現(xiàn)包涵體以及示，重癥病例初期與犬瘟熱極為相似，僅靠臨床癥出血為特征，常引起急性壞死性肝炎和角膜混濁(即狀和病理變化難以進行鑒別診斷，確診尚需依賴于實驗室特異性診斷，如病毒分離、血凝抑制試驗及基金項目：國家質檢總局項目科技計劃項目(2012IK015)通訊作者：曹丙蕾，E—mai
