資源描述：
《LAMP快速檢測犬傳染性肝炎方法的建立及應(yīng)用-論文.pdf》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、2014年第31卷第8期LAMP快速檢測犬傳染性肝炎方法的建立及應(yīng)用曹丙蕾，凌宗帥，邱洪凱(1．濟(jì)南出入境檢驗(yàn)檢疫局，山東濟(jì)南250014；2．山東正邦養(yǎng)殖有限公司，山東濟(jì)南250010)摘要：根據(jù)GenBank上公布的犬腺病毒I型(CAV-I)E3基因序列，設(shè)計(jì)了3對特異性環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)引物，以CAV-IDNA為模板，通過條件優(yōu)化建立了犬傳染性肝炎LAMP快速檢測方法，該方法能夠在63℃恒溫下30min內(nèi)實(shí)現(xiàn)目的核酸的大量擴(kuò)增，在可見光下即可直接觀察擴(kuò)增產(chǎn)物熒光顏色變化來判定結(jié)果。特異
2、性和靈敏度試驗(yàn)表明，該LAMP檢測方法只對CAV-I有特異性擴(kuò)增，對其他無關(guān)核酸無擴(kuò)增。與常規(guī)PCR檢測相比，LAMP的檢測靈敏度較好，最低檢出限為10～TCID是PCR檢測方法的100倍。臨床樣品檢測結(jié)果表明，LAMP陽性檢出率為36％，與病毒分離鑒定的結(jié)果符合率達(dá)96．8％，與PCR檢測的結(jié)果符合率達(dá)100％，且快速簡便，成本低，適用于基層實(shí)驗(yàn)室的快速疾病診斷。關(guān)鍵詞：LAMP；犬傳染性肝炎；犬腺病毒I型中圖分類號：$855．3文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1005—944X(2014)08．0073
3、．04EstablishmentandApplicationofLAMPfortheRapidDetectionofInfectiousCanineHepatitisCaoBinglei，LingZongshuai，QiuHongkai(1．JinanEntry—ExitInspectionandQuarantineBureau，Jinan，Shandong250014；2．ShandongZhengbangBreedingGroupCO．，LTD．，Jinan，Shandong250010)Abs
4、tract：Todeveloparapidmethodforthedetectionofinfectiouscaninehepatitis，LAMPwasestablishedusingthreepairsofspecificprimersfortheE3geneofCAV—IaccordingtothesequencesinGenBank．Theassaywasoptimizedtoobtainabigamountofamplificationproductsat63℃for30minandthe
5、amplificationproductscouldbeobservedbythenakedeyes．ItwasshownthattheLAMPwasabletospecificallyamplifyCAIDNA，withoutcross-reactionwithOtherirrelevantnucleotidesanditwas100timesmoresensitivethanPCRassaywithalowestdetectionlimitvalueof10TCIDn／0．1mL．Thedete
6、ctionofclinicalsamplesshowedthatthepositiverateofLAMPwas43％．Inaddition，theagrcementratebetweenLAMPandthevirusisolationwas96．8％butbetweenLAMPandPCRwasupto100％．LAMPwasmoresensitiveandsimpleandcouldbeappliedtorapiddiagnosisofCAI．Keywords：LAMP：infectiousca
7、ninehepatitis：canineadenovirusI犬傳染性肝炎(infectiouscaninehepatitis，ICH)藍(lán)眼病)[3-4]o該病以剛斷乳到一歲以內(nèi)的幼犬感是由犬腺病毒I型(canineadenovirusI，CAV_I)染率和死亡率為最高，死亡率可高達(dá)400／0[2]。本病感染引發(fā)的犬的一種急性敗血性傳染病。該病于在世界范圍內(nèi)流行，既嚴(yán)重威脅著家養(yǎng)寵物的身體1925年首次被發(fā)現(xiàn)]，1984年，我國首次分離到健康，又對我國養(yǎng)犬業(yè)、皮毛動物養(yǎng)殖業(yè)等危害較該病毒，CAV-I
8、在臨床上可導(dǎo)致犬傳染性肝炎、狐大，給養(yǎng)犬業(yè)和寵物愛好者帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。貍和熊腦炎等疾病的發(fā)生[2】。臨床上以肝小葉中心突然發(fā)病和出血時(shí)間延長是犬傳染性肝炎的暗壞死、肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞和皮質(zhì)細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)包涵體以及示，重癥病例初期與犬瘟熱極為相似，僅靠臨床癥出血為特征，常引起急性壞死性肝炎和角膜混濁(即狀和病理變化難以進(jìn)行鑒別診斷，確診尚需依賴于實(shí)驗(yàn)室特異性診斷，如病毒分離、血凝抑制試驗(yàn)及基金項(xiàng)目：國家質(zhì)檢總局項(xiàng)目科技計(jì)劃項(xiàng)目(2012IK015)通訊作者：曹丙蕾，E—mai
